PFP Assay Kit (Microanalysis)

PFP催化6-磷酸果糖转化为1,6-二磷酸果糖，它在醛缩酶和磷酸丙糖异构酶的作用下转变为3-磷酸甘油醛，再由3-磷酸甘油醛脱氢酶和NADH催化生成3-磷酸甘油酸、NAD和磷酸，340nm处的吸光度变化反映了PFP的活性的高低。

100T/96S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、天平、低温离心机、研钵。

二、酶液提取
1.组织：按照质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL CB0304M-ES）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心10min，取上清置冰上待测。
2.细胞：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL CB0304M-ES），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后4℃，10000g离心10min，取上清置冰上待测。
3.液体：直接检测。

三、测定步骤：
1.紫外分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2.取微量石英比色皿/96孔板，依次加入：

四、计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1.按照样本蛋白浓度计算
酶活单位定义：每毫克组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PFP (nmol/min /mg prot) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr)÷T = 321.54×ΔA÷Cpr
2.按照样本质量计算
酶活单位定义：每克组织每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PFP (nmol/min /g 鲜重) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(W ×V样÷V样总)÷T = 321.54×ΔA÷W
3.按照细胞数量计算
酶活单位定义：每10⁴个细胞每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PFP (nmol/min/10⁴ cell) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)÷T = 321.54×ΔA÷细胞数量
4.按照液体体积计算
酶活单位定义：每毫升液体每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PFP (nmol/min/mL) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷V样÷T = 321.54×ΔA
注：V反总：反应体系总体积，0.2mL；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×10³ L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。

b. 用96孔板测定的计算公式如下
1.按照样本蛋白浓度计算
酶活单位定义：每毫克组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PFP (nmol/min /mg prot) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr)÷T = 643.08×ΔA÷Cpr
2.按照样本质量计算
酶活单位定义：每克组织每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PFP (nmol/min /g 鲜重) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(W ×V样÷V样总)÷T = 643.08×ΔA÷W
3.按照细胞数量计算
酶活单位定义：每10⁴个细胞每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PFP (nmol/min /10⁴ cell) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)÷T = 643.08×ΔA÷细胞数量
4.按照液体体积计算
酶活单位定义：每毫升液体每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PFP (nmol/min /mL) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷V样÷T = 643.08×ΔA
注：V反总：反应体系总体积，0.2mL；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×10³ L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。

1.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。