PFP Assay Kit (UV Spectrophotometry)

Name: PFP Assay Kit (UV Spectrophotometry)
Brand: TargetMol
SKU: CB0304UV
Rating: 5 (4 reviews)

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产品编号 CB0304UV

别名 焦磷酸：果糖-6-磷酸-1-磷酸转移酶活性检测试剂盒（紫外分光光度法）

焦磷酸：果糖-6-磷酸-1-磷酸转移酶（Pyrophosphate: fructose-6 – phosphate-1-phosphoric acid transferase, PFP; EC.90）是一种胞质酶，广泛存在于植物组织中，催化果糖-6-磷酸与果糖-1,6-二磷酸之间的可逆转化，在光合作用碳代谢中起重要作用。

规格	价格	库存	数量
50 T	¥ 1,814	10-12日内发货

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实验操作小课堂

常见问题解答

检测原理

PFP催化6-磷酸果糖转化为1,6-二磷酸果糖，它在醛缩酶和磷酸丙糖异构酶的作用下转变为3-磷酸甘油醛，再由3-磷酸甘油醛脱氢酶和NADH催化生成3-磷酸甘油酸、NAD和磷酸，340nm处的吸光度变化反映了PFP的活性的高低。

产品规格

50T/48S规格的产品组成及保存条件：

编号	规格	储存条件
CB0304UV-ES	50mL×1瓶	4℃保存；
CB0304UV-A	30mL×1瓶	4℃避光保存；
CB0304UV-B	粉剂×1瓶	-20℃避光保存。临用前加5mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
CB0304UV-C	粉剂×1瓶	-20℃避光保存。临用前加5mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
CB0304UV-D	0.5mL×1瓶	4℃避光保存；
CB0304UV-E	0.5mL×1瓶	4℃避光保存；
CB0304UV-F	5mL×1瓶	4℃避光保存；

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

操作说明

一、自备用品：
紫外分光光度计/酶标仪、1mL石英比色皿、天平、低温离心机、研钵。

二、酶液提取
1.组织：按照质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL CB0304UV-ES）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心10min，取上清置冰上待测。
2.细胞：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL CB0304UV-ES），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后4℃，10000g离心10min，取上清置冰上待测。
3.液体：直接检测。

三、测定步骤：
1.紫外分光光度计预热30min，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2.取1mL石英比色皿，依次加入：

试剂名称	测定管（µL）
CB0304UV-A	580
CB0304UV-B	100
CB0304UV-C	100
CB0304UV-D	10
CB0304UV-E	10
CB0304UV-F	100
粗酶液	100
充分混匀，记录340nm处10s的吸光值A1和310s的吸光值A2，△A=A1-A2

四、计算公式：
1.按照样本蛋白浓度计算
酶活单位定义：每毫克组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PFP (nmol/min /mg prot) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr)÷T = 321.54×ΔA÷Cpr
2.按照样本质量计算
酶活单位定义：每克组织每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PFP (nmol/min /g 鲜重) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(W ×V样÷V样总)÷T = 321.54×ΔA÷W
3.按照细胞数量计算
酶活单位定义：每10⁴个细胞每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PFP (nmol/min/10⁴ cell) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)÷T = 321.54×ΔA÷细胞数量
4.按照液体体积计算
酶活单位定义：每毫升液体每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PFP (nmol/min/mL) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷V样÷T = 321.54×ΔA
注：V反总：反应体系总体积，1mL；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×10³ L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.1mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。