Pectinase Assay Kit (Spectrophotometry)

果胶酶水解果胶生成半乳糖醛酸，具有还原性醛基，与DNS试剂反应生成红棕色物质，在540nm有特征吸收峰，测定540nm处吸光值变化可计算得果胶酶活性。

50T/24S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、天平、低温离心机、恒温水浴锅、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

二、酶液提取
1.组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL CB0296S-ES），进行冰浴匀浆，然后10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2.细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL CB0296S-ES），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃离心10min，取上清置于冰上待测。
3.细胞培养液等：直接检测。

三、测定步骤：
1.分光光度计预热30min以上，调节波长至540nm处，蒸馏水调零；
2.煮沸样本：建议在沸水中煮沸10分钟，以将酶彻底灭活；
3.将100μmol/mL 标准液用蒸馏水稀释为15、10、7.5、5、2.5、1.25 μmol/mL 的标准溶液备用；
4.操作表（在EP管中依次加入）：

四、酶活性计算公式：
1.标准曲线的绘制：以各个标准溶液的浓度为 x 轴，其对应的△A标准为 y 轴，绘制标准曲线，得到标准方程 y=kx+b，将 ΔA带入方程得到 x(μmol/mL)。
2.按照蛋白浓度计算
酶活性定义：在50℃，pH3.5条件下，每毫克蛋白每小时分解果胶产生1μmol半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
果胶酶活性 (U/mg prot) =x×V提取÷(V提取×Cpr)÷T= 2x÷Cpr
3.按照样本质量计算
酶活性定义：在50℃，pH3.5条件下，每克样本每小时分解果胶产生1μmol半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
果胶酶活性 (U/g鲜重) =x×V提取÷W÷T=2x÷W
4.按细胞数量计算
酶活性定义：在50℃，pH3.5条件下，每10⁴细胞每小时分解果胶产生1μmol半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
果胶酶活性 (U/10⁴ cell) =x×V提取÷T÷细菌数量(万个)=2x÷细菌数量(万个)
5.细胞培养液体积计算
酶活性定义：在50℃，pH3.5条件下，每毫升培养液每小时分解果胶产生1μmol半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
果胶酶活性 (U/mL) =x×V样÷V样÷T= 2x
注：V样：反应中样本体积，0.1mL；V提取：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W，样本质量，g；T：反应时间，0.5h。

1.CB0296S-B若有沉淀析出，请置于50℃加热溶解。
2.测定之前请先做预实验，如果吸光值较高或较低，请用提取液做适当的稀释或者加大样本量，并在计算公式中乘以稀释倍数或者以实际加入的样本体积参与计算。
3.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。