Pectinase Assay Kit (Microanalysis)

果胶酶水解果胶生成半乳糖醛酸，具有还原性醛基，与DNS试剂反应生成红棕色物质，在540nm有特征吸收峰，测定540nm处吸光值变化可计算得果胶酶活性。

100T/48S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、低温离心机、恒温水浴锅。

二、酶液提取
1.组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL CB0296M-ES），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2.细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL CB0296M-ES），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃离心10min，取上清置于冰上待测。
3.细胞培养液等：直接检测。

三、测定步骤：
1.分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至540nm处，蒸馏水调零；
2.操作表（在EP管中依次加入）：

四、酶活性计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y =3.9642x - 0.008；R² = 0.9996；x为标准品浓度，mg/mL；y为吸光值。
1.按照蛋白浓度计算
酶活性定义：在50℃，pH3.5条件下，每毫克蛋白每小时分解果胶产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
果胶酶活性 (mg/h/mg prot) = (ΔA+0.008)÷3.9642×V反总÷(V样×Cpr)÷T =2.523×(ΔA+0.008)÷Cpr
2.按照样本质量计算
酶活性定义：在50℃，pH3.5条件下，每克样本每小时分解果胶产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
果胶酶活性 (mg/h /g 鲜重) = (ΔA+0.008)÷3.9642×V反总÷(V样×W÷V样总)÷T =2.523×(ΔA+0.008)÷W
3.按细胞数量计算
酶活性定义：在50℃，pH3.5条件下，每10⁴细胞每小时分解果胶产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
果胶酶活性 (mg/h /10⁴cell) = (ΔA+0.008)÷3.9642×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)÷T =2.523×(ΔA+0.008)÷细胞数量
4.细胞培养液体积计算
酶活性定义：在50℃，pH3.5条件下，每毫升培养液每小时分解果胶产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
果胶酶活性 (mg/h /mL) = (ΔA+0.008)÷3.9642×V反总÷V样÷T =2.523×(ΔA+0.008)
注：V反总：反应总体积，0.15mL；V样：反应中样本体积，0.03mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W，样本质量，g；T：反应时间，0.5h。

b. 用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y =1.9821x - 0.008，R² = 0.9996；x为标准品浓度，mg/mL；y为吸光值。
1.按照蛋白浓度计算
酶活性定义：在50℃，pH3.5条件下，每毫克蛋白每小时分解果胶产。生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
果胶酶活性 (mg/h/mg prot) = (ΔA+0.008)÷1.9821×V反总÷(V样×Cpr)÷T =5.045×(ΔA+0.008)÷Cpr
2.按照样本质量计算
酶活性定义：在50℃，pH3.5条件下，每克样本每小时分解果胶产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
果胶酶活性 (mg/h/g 鲜重) = (ΔA+0.008)÷1.9821×V反总÷(V样×W÷V样总)÷T =5.045×(ΔA+0.008)÷W
3.按细胞数量计算
酶活性定义：在50℃，pH3.5条件下，每10⁴细胞每小时分解果胶产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
果胶酶活性 (mg/h /10⁴cell) = (ΔA+0.008)÷1.9821×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)÷T =5.045×(ΔA+0.008)÷细胞数量
4.细胞培养液体积计算
酶活性定义：在50℃，pH3.5条件下，每毫升培养液每小时分解果胶产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
果胶酶活性 (mg/h/mL) = (ΔA+0.008)÷1.9821×V反总÷V样÷T =5.045×(ΔA+0.008)
注：V反总：反应总体积，0.15mL；V样：反应中样本体积，0.03mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W，样本质量，g；T：反应时间，0.5h。

1.CB0296M-B若有沉淀析出，请置于50℃加热溶解。
2.测定之前请先做预实验，如果吸光值较高或较低，请用提取液做适当的稀释或者加大样本量，并在计算公式中乘以稀释倍数或者以实际加入的样本体积参与计算。
3.煮沸样本建议在沸水中煮沸10分钟，以将酶彻底灭活。
4.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。