NCR Assay Kit (Visible Spectrophotometry)

Name: NCR Assay Kit (Visible Spectrophotometry)
Brand: TargetMol
SKU: CB0139V
Rating: 5 (4 reviews)

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产品编号 CB0139V

别名 NADPH-细胞色素C还原酶活性检测试剂盒（可见分光光度法）

细胞色素P450酶是一组主要存在于肝脏的同工酶，在外源物质代谢中具有重要作用，尤其是药物和毒物的代谢。NADPH-细胞色素C还原酶（NADPH cytochrome c reductase, NCR）作为P450酶系的重要一员，催化氧化型P450还原再生。

规格	价格	库存	数量
50 T	¥ 968	10-12日内发货

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实验操作小课堂

常见问题解答

检测原理

NCR催化NADPH还原氧化型细胞色素C，还原型细胞色素C在550nm处有特征吸收峰；通过测定550nm吸光度的增加速率，来计算NCR活性。

产品规格

50T/48S规格的产品组成及保存条件：

编号	规格	储存条件
CB0139V-A	粉剂×2瓶	4℃保存；临用前取一瓶加50mL蒸馏水充分溶解，用不完的试剂可保存4周；
CB0139V-B	80mL×1瓶	4℃保存；
CB0139V-C	粉剂×2瓶	-20℃保存；临用前取一瓶加1.3 mL蒸馏水充分溶解，用不完的试剂-20℃分装保存 2 周，避免反复冻融；
CB0139V-D	粉剂×2支	4℃保存；临用前取一瓶加275μL蒸馏水充分溶解，用不完的试剂-20℃分装保存 4 周，避免反复冻融。

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

操作说明

一、自备用品：
可见分光光度计、恒温培养箱/水浴锅、1mL玻璃比色皿、低温离心机，超速离心机、可调式移液枪、冰和蒸馏水。

二、粗酶液提取：
1.除去细胞核和线粒体等：称约0.5g组织，加入4℃预冷的1 mL CB0139V-A，冰上充分研磨，10 000g 4℃离心30min，取上清液，转移到超速离心管中。
2.粗制微粒体：4℃，100 000g，离心60min，弃上清液。
3.除血红蛋白等杂质：向步骤2的沉淀中加1 mL CB0139V-A，盖紧后充分震荡溶解，100 000g离心30min，弃上清液。
4.最终微粒体：向步骤3的沉淀中加CB0139V-B 0.5 mL，盖紧后充分震荡溶解，4℃保存待测。

三、测定步骤：
1.分光光度计预热30 min，调节波长到550 nm，蒸馏水调零。
2.CB0139V-B在37℃水浴中预热30min。
3.取1ml玻璃比色皿依次加入下列试剂：

	空白管（μL）	测定管（μL）
蒸馏水	50
CB0139V-B	900
CB0139V-C	50
CB0139V-D	10
迅速混匀后于550nm处测定2min内吸光值变化，第10s和第130s吸光值。 △A空白管=A2-A1。
提取液		50
CB0139V-B		900
CB0139V-C		50
CB0139V-D		10
迅速混匀后于550nm处测定2min内吸光值变化，第10s和第130s吸光值。 △A测定管=A4-A3。

注意：空白管只需做1-2次。

四、NCR活性计算公式：
1.按蛋白浓度计算
活性单位定义：37℃中，每毫克蛋白每分钟催化产生1μmol还原型细胞色素C为1个酶活单位。
NCR (U/mg prot) = (△A测定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反总÷(Cpr×V样)÷T=0.529×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr
2.按样本鲜重计算
活性单位定义：37℃中，每克组织每分钟催化产生1μmol还原型细胞色素C为1个酶活单位。
NCR (U/g 鲜重) = (△A测定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反总÷(V样÷V样总×W)÷T= 0.265×(△A测定管-△A空白管)÷W
注：ε：还原型细胞色素C摩尔消光系数，19100L/mol/cm=0.0191L/μmol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应体系总体积，1010μL=0.00101L；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL，需要另外测定；V样：加入反应体系中上清液体积，50μL=0.05mL；V样总：样本处理中最后加入CB0139V-B体积，0.5mL；W：样本质量，g；T：反应时间，2min。

注意事项

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.若吸光值 A＞1.2 或 ΔA＞0.8，建议稀释样本后再测定，计算公式中乘以稀释倍数。
3.若吸光值较低或接近空白 OD 值，建议增加样本量后再进行测定，注意同步修改计算公式。
4.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。