MAO Assay Kit (Microanalysis)

以苄胺为底物，在 MAO 作用下，生成苄醛，以环已烷提取，在 242nm 测定吸光度，可测算出酶的活力。

100T/96S规格的产品组成及保存条件： 

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、天平、低温离心机、蒸馏水。

二、粗酶液提取
1.组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL CB0278M-ES-1）进行冰浴匀浆，10000g，4℃，离心10min，弃沉淀；把上清转移到另一预冷的离心管，10000g，4℃，离心30min，弃上清；加入1.0 mL预冷的CB0278M-ES-2，震荡混匀，16000g，4℃，离心40min，弃上清；沉淀加入预冷的1.0 mL CB0278M-A，震荡混匀，即粗酶液（可用于可溶性蛋白浓度测定）取上清置于冰上待测。
2.细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL CB0278M-ES-1），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，弃沉淀；把上清转移到另一预冷的离心管，10000g，4℃，离心30min，弃上清；加入1.0 mL预冷的CB0278M-ES-2，震荡混匀，16000g，4℃，离心40min，弃上清；沉淀加入预冷的1.0 mL CB0278M-A，震荡混匀，即粗酶液（可用于可溶性蛋白浓度测定），取上清置于冰上待测。
3.血清：直接测定。

三、测定步骤：
1.分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至242nm。
2.样本测定：在微量石英比色皿/96孔板中加入下列试剂：

四、MAO活性计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1.按蛋白含量计算
酶活定义：37℃，pH7.6时，每毫克蛋白质1min内转化1nmol底物的酶量为一个酶活单位。
DAO活性(U/mg prot) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr)÷T = 114×ΔA÷Cpr
2.按样本质量计算
酶活定义：37℃，pH7.6时，每克样品1min内转化1nmol底物的酶量为一个酶活单位。
DAO活性 (U/g鲜重) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样÷V样总×W)÷T = 114×ΔA÷ W
3.按照细胞数量计算
酶活定义：37℃，pH7.6时，每10⁴ 个细胞1min内转化1nmol底物的酶量为一个酶活单位。
DAO活性 (U/10⁴ cell) =ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样÷V样总×细胞数量)÷T = 114×ΔA÷细胞数量
4.按照液体体积计算
酶活定义：37℃，pH7.6时，每升血清1min内转化1nmol底物的酶量为一个酶活单位。
DAO活性(U/L) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷V样 = 114×ΔA
注：ε：底物摩尔消光系数，1460L /mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应总体积，0.2mL；V样：反应中样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；T：反应时间，60min，W：样本质量，g。

b. 用96孔板测定的计算公式如下
1.按蛋白含量计算
酶活定义：37℃，pH7.6时，每毫克蛋白质1min内转化1 nmol底物的酶量为一个酶活单位。
DAO活性(U/mg prot) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr)÷T = 228×ΔA÷Cpr
2.按样本质量计算
酶活定义：37℃，pH7.6时，每克样品1min内转化1nmol底物的酶量为一个酶活单位。
DAO活性 (U/g鲜重) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样÷V样总×W)÷T = 228×ΔA÷ W
3.按照细胞数量计算
酶活定义：37℃，pH7.6时，每10⁴个细胞1min内转化1nmol底物的酶量为一个酶活单位。
DAO活性 (U/10⁴ cell) =ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样÷V样总×细胞数量)÷T = 228×ΔA÷细胞数量
4.按照液体体积计算
酶活定义：37℃，pH7.6时，每升血清1min内转化1nmol底物的酶量为一个酶活单位。
DAO活性(U/L) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷V样 = 228×ΔA
注：ε：底物摩尔消光系数，1460L /mol /cm；d：96孔板光径，0.5cm；V反总：反应总体积，0.2mL；V样：反应中样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；T：反应时间，60min，W：样本质量，g。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.吸光度变化应该控制在0.01~0.8之间。否则加大样品量或稀释样品，注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变。
3.样品蛋白质含量需要另外测定。
4.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。