Name: Laccase Assay Kit (Microanalysis)
Brand: TargetMol
SKU: CB0279M
Rating: 5 (4 reviews)

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100 T

¥ 1,296

4-6日内发货

产品规格

100T/48S规格的产品组成及保存条件：

编号	规格	储存条件
CB0279M-ES	60mL×1瓶	4℃保存；
CB0279M-A	30mL×1瓶	4℃保存；
CB0279M-B	粉剂×1瓶	4℃避光保存，临用前加15mL CB0279M- A溶解；一周内有效。

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

操作说明

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、低温离心机、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、恒温水浴锅。

二、粗酶液提取
1.组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL CB0279M-ES），进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心15min，取上清，置冰上待测。
2.细胞：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL CB0279M-ES），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后4℃，12000g离心15min，取上清置于冰上待测。
3.培养液：直接检测。

三、测定步骤：
1.分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至420nm。
2.样本测定：

试剂名称	对照管（μL）	测定管（μL）
样品	45	45
CB0279M-A	255
CB0279M-B		255
60℃水浴20min后冷却至室温，取200μL反应液于微量玻璃比色皿/96孔板中测定420nm处吸光值A，ΔA=A测定管-A对照管

四、酶活性计算公式：
a. 用微量玻璃比色皿测定的计算公式如下
1.按照蛋白浓度计算
酶活性定义：每毫克蛋白每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。
漆酶活性 (U/mg prot) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr)÷T = 9.26×ΔA÷Cpr
2.按照样本质量计算
酶活性定义：每克样品每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。
漆酶活性 (U/g 鲜重) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×W÷V样总)÷T = 9.26×ΔA÷W
3.按照细胞数量计算
酶活性定义：每10⁴个细胞每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。
漆酶活性 (U/10⁴ cell) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)÷T = 9.26×ΔA÷细胞数量
4.按照液体体积计算
酶活性定义：每升培养液每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。
漆酶活性 (U/L) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷V样÷T = 9260×ΔA
注：ε：ABTS毫摩尔消光系数：36L/mmol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应总体积，0.3mL；V样：反应体系中样本体积，0.045mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W，样本质量，g；T：反应时间，20min。

b. 用96孔板测定的计算公式如下
1.按照蛋白浓度计算
酶活性定义：每毫克蛋白每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。
漆酶活性 (U/mg prot) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr)÷T = 18.52×ΔA÷Cpr
2.按照样本质量计算
酶活性定义：每克样品每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。
漆酶活性 (U/g 鲜重) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×W÷V样总)÷T = 18.52×ΔA÷W
3.按照细胞数量计算
酶活性定义：每10⁴个细胞每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。
漆酶活性 (U/10⁴ cell) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)÷T = 18.52×ΔA÷细胞数量
4.按照液体体积计算
酶活性定义：每升培养液每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。
漆酶活性 (U/L) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷V样÷T = 18520×ΔA
注：ε：ABTS毫摩尔消光系数：36L/mmol/cm；d：比色皿光径，0.5cm；V反总：反应总体积，0.3mL；V样：反应中样本体积，0.045mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W，样本质量，g；T：反应时间，20min。