Laccase Assay Kit (Spectrophotometry)

漆酶分解底物ABTS产生ABTS自由基，在420nm处的吸光系数远大于底物ABTS，测定ABTS自由基的增加速率，可计算得漆酶活性。

50T/24S规格的产品组成及保存条件： 

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、天平、低温离心机、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、恒温水浴锅。

二、粗酶液提取
1.组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL CB0279S-ES），进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心15min，取上清，置冰上待测。
2.细胞：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL CB0279S-ES），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后4℃，12000g离心15min，取上清置于冰上待测。
3.培养液：直接检测。

三、测定步骤：
1.分光光度计预热30min，调节波长至420nm，蒸馏水调零。
2.样本测定：

四、酶活性计算公式：

1.按照蛋白浓度计算
酶活性定义：每毫克蛋白每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。
漆酶活性 (U/mg prot) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr)÷T = 9.26×ΔA÷Cpr
2.按照样本质量计算
酶活性定义：每克样品每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。
漆酶活性 (U/g 鲜重) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×W÷V样总)÷T = 9.26×ΔA÷W
3.按照细胞数量计算
酶活性定义：每10⁴个细胞每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。
漆酶活性 (U/10⁴ cell) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)÷T = 9.26×ΔA÷细胞数量
4.按照液体体积计算
酶活性定义：每升培养液每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。
漆酶活性 (U/L) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷V样÷T = 9260×ΔA
注：ABTS毫摩尔消光系数：36L/mmol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应总体积，1mL；V样：反应中样本体积，0.15mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W，样本质量，g；T：反应时间，20min。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。