HR Assay Kit (Microanalysis)

Name: HR Assay Kit (Microanalysis)
Brand: TargetMol
SKU: CB0268M
Rating: 5 (4 reviews)

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产品编号 CB0268M

别名 土壤羟胺还原酶活性检测试剂盒（微量法）

土壤羟胺还原酶（hydroxylamine reductase, HR）能将土壤中氮代谢过程中形成的中间产物羟胺还原为氨，土壤中的还原态化合物可作为氢的供体，其强弱影响到土壤氮代谢过程中氮素的氨挥发损失，间接影响氮肥的利用效率。

规格	价格	库存	数量
100 T	¥ 1,728	10-12日内发货

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实验操作小课堂

常见问题解答

检测原理

硫酸铁铵中的Fe³⁺可将羟胺氧化为氮气，自身被还原为Fe²⁺，Fe²⁺在弱酸条件下与邻菲罗琳形成橙红色配合物，在510nm处有吸收峰，羟胺还原酶作用于羟胺，使配合物形成量减少，510nm处吸光值的减少可反映羟胺还原酶的活性。

产品规格

100T/48S规格的产品组成及保存条件：

编号	规格	储存条件
CB0268M-A	4mL×1瓶	4℃保存；
CB0268M-B	粉剂×1瓶	4℃保存；临用前加4mL蒸馏水溶解。
CB0268M-C	12mL×1瓶	4℃保存；
CB0268M-D	8mL×1瓶	4℃保存；
CB0268M-E	4mL×1瓶	4℃保存；
CB0268M-F	2mL×1瓶	4℃避光保存；
CB0268M-G	2mL×1瓶	4℃避光保存；
CB0268M-Standard	粉剂×1 支	临用前加 1.028mL 蒸馏水充分溶解，制备 140μmol/mL 盐酸羟胺标准溶液待用，4℃保存保存 2 周

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

操作说明

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、天平、常温离心机、震荡仪、氮吹仪。

二、样本处理
新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30~50目筛。

三、测定步骤：
1.分光光度计预热30min以上，调节波长至510nm，蒸馏水调零。
2.标准液的稀释：将140μmol/mL标准液用蒸馏水稀释至4.375、2.1875、1.094、0.547、0.2735、0.13675μmol/mL 的标准液备用。
3.样本测定，（在EP 管中依次加入下列试剂）：

	无基质管	对照管	测定管	标准管	空白管
风干土样（g）		0.02	0.02
CB0268M-A（μL）	40		40
蒸馏水（μL）		40			40
标准溶液				40
CB0268M-B（μL）	40	40	40	40	40
CB0268M-C（μL）	120	120	120	120	120
混匀后，用N₂气流排除管中空气，立即密封，于30℃反应1h
CB0268M-D（μL）	80	80	80	80	80
充分震荡10min，8000rpm，25℃，离心10min
上清液（μL）	20	20	20	20	20
CB0268M-E（μL）	40	40	40	40	40
CB0268M-F（μL）	20	20	20	20	20
CB0268M-G（μL）	20	20	20	20	20
蒸馏水（μL）	100	100	100	100	100
充分混匀，25℃静置显色10min，用蒸馏水调零，于微量石英比色皿/96孔板测定510nm各管吸光值，分别记为A空白管、A标准管、A对照管、A测定管，ΔA=A空白管-（A测定管-A对照管）。

四、计算公式：
a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.185x -0.1828，R² = 0.9992
酶活定义：每克土壤每天转化1μg羟胺为一个酶活力单位。
HR活性 (μg/d /g土样) = (ΔA+ 0.1828)÷0.185×V反总÷W÷T = 36.32×(ΔA+0.1828)÷W

b. 使用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.0925x -0.1828，R² = 0.9992
酶活定义：每克土壤每天转化1μg羟胺为一个酶活力单位。
HR活性 (μg/d /g土样) = (ΔA+ 0.1828)÷0.0925×V反总÷W÷T = 72.64×(ΔA+0.1828)÷W
注：V反总：加入提取液体积，0.28mL；W：样本质量，g；T：1/24h。

注意事项

1.土壤表层溶解氧浓度较大，取样应取表层5cm以下的土壤，否则酶活性较低或者测定不到。
2.CB0268M-C尽量不要敞口放置，取完立即加盖拧紧。
3.反应体系最好能用氮吹仪排除溶解氧，若无此装置，则加入试剂三后立即密封，于30℃反应1h。
4.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。