HP Assay Kit (Microanalysis)

以一定浓度的Fe²⁺为底物，在亚铁氧化酶的催化作用下 Fe²⁺被氧化为 Fe³⁺，Fe²⁺与菲咯嗪形成有色复合物，在562 nm 处有特征吸收峰，先计算出未被氧化的 Fe²⁺ 的含量，进而得出被氧化的 Fe²⁺ 的含量，可通过 Fe²⁺被氧化的速率来反映亚铁氧化酶活性。

100T/48S规格的产品组成及保存条件： 

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、台式离心机、可调式移液器、研钵、水浴锅/恒温水浴锅、冰和蒸馏水。

二、粗酶液提取：
按照组织质量（g）：水（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL蒸馏水），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

三、测定步骤：
1.分光光度计/酶标仪预热30 min以上，调节波长至562 nm。
2.标准品的稀释：将 9µmol/mL 的亚铁离子标准液用蒸馏水倍比稀释为 360、180、90、45、22.5、11.25、5.625 nmol/mL 的标准溶液备用。
3.样本测定：在96孔板中加入下列试剂：

四、HP活性计算公式：
以各个标准溶液的浓度(nmol/mL)为 x 轴，其对应的 ΔA标准为 y 轴，绘制标准曲线，得到标准方程 y= kx+b，将 ΔA测定带入方程得到样本浓度(x，nmol/mL)。
1.按样本质量计算：
单位定义：每g样本每分钟氧化1nmol Fe²⁺定义为一个酶活力单位。
HP (U/g 鲜重) =x×V_CB0276M-B÷(V样×W÷V提取)÷T×N =1.667x÷W×N
2.按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每mg蛋白每分钟氧化1nmol Fe²⁺定义为一个酶活力单位。
HP (U/mg prot) =x×V_CB0276M-B÷(V样×Cpr)÷T ×N=1.667x÷Cpr×N
3.按液体体积计算：
单位定义：每mg蛋白每分钟氧化1nmol Fe²⁺定义为一个酶活力单位。
HP (U/mg prot) =x×V_CB0276M-B÷(V样×Cpr)÷T ×N=1.667x÷Cpr×N
注：V总：反应体系体积，0.1 mL；V样：加入样本体积0.01 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，30min；W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；1000，μmol到nmol的转换系数。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。