HP Assay Kit (Visible Spectrophotometry)

以一定浓度的Fe²⁺为底物，在亚铁氧化酶的催化作用下 Fe²⁺被氧化为 Fe³⁺，Fe²⁺与菲咯嗪形成有色复合物，在562 nm 处有特征吸收峰，先计算出未被氧化的 Fe²⁺ 的含量，进而得出被氧化的 Fe²⁺ 的含量，可通过 Fe²⁺被氧化的速率来反映亚铁氧化酶活性。

50T/24S规格的产品组成及保存条件： 

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。

二、粗酶液提取：
按照组织质量（g）：水（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL蒸馏水），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

三、测定步骤：
1.分光光度计预热30min以上，调节波长至560 nm，蒸馏水调零。
2.样本测定，在玻璃比色皿中加入下列试剂：

四、HP活性计算公式：
标准曲线：y = 16.427x - 0.0006，R² = 0.9998；(x为标准品浓度，μmol/mL；y为吸光值ΔA)
1.按样本质量计算：
单位定义：每g样本每分钟氧化1nmol Fe²⁺定义为一个酶活力单位。
HP (nmol/min/g 鲜重) = (ΔA+0.0006)÷16.427×V总÷T÷(W× V样÷V样总)× 1000 = 20.29×(ΔA+0.0006)÷W
2.按样本蛋白浓度计算
单位定义：每mg蛋白每分钟氧化1nmol Fe²⁺定义为一个酶活力单位。
HP (nmol/min/mg prot) = (ΔA+0.0006)÷16.427×V总÷T÷(Cpr×V样)×1000 = 20.29×(ΔA+0.0006)÷Cpr
注：V总：反应体系体积，0.1 mL；V样：加入样本体积0.01 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，30min；W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；1000，μmol到nmol的转换系数。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。