Hoechst 33342 Staining Solution

1. 细胞核标记特异性强，对DNA的亲和力显著高于RNA，RNA背景干扰小。
2. 细胞毒性低，可用于活细胞标记研究。
3. 兼容性好，可与多重荧光探针共染。
4. 操作简便，检测快速。

细胞凋亡检测、细胞周期分析、细胞活性鉴定、药物毒理学评估。

用PBS将Hoechst 33342储备液稀释为0.5-10 μg/mL的Hoechst 33342染色工作液（避光操作）。具体浓度根据样本和实验需要进行调整。

1. 贴壁细胞染色
   （1）吸除旧培养基，加入适量PBS洗涤细胞1-3次，每次3 min。
   （2）（可选）加入4%多聚甲醛，室温固定10 min。吸除固定液，PBS洗涤3次，每次3 min。
   （3）（可选）若需要免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，再进行Hoechst 33342染色。若不需其它染色，则直接进行Hoechst 33342染色。
   （4）加入适量Hoechst 33342染色工作液覆盖住细胞。对于固定的组织和细胞，室温下避光孵育3-8 min；对于活细胞或培养的组织，于37℃避光孵育20-30 min。
   （5）孵育完成后，吸除染色液，加入PBS洗涤细胞2-3次，每次3 min。
   （6）在载玻片上滴加适量抗荧光猝灭液，将有细胞的那面爬片贴合抗荧光猝灭液并放置其上，在爬片周围滴加封片液以封片。
   （7）在荧光显微镜下观察并拍照记录。Ex=350 nm，Em=461 nm左右。
2. 悬浮细胞染色
   （1）以600×g、4℃离心5 min收集悬浮细胞，弃上清。加入PBS重悬细胞，以600×g、4℃离心5 min，弃上清。用PBS重复洗涤细胞0-2次。
   （2）（可选）加入4%多聚甲醛，室温固定10 min。吸除固定液，PBS洗涤3次，每次3 min。
   （3）（可选）若需要免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，再进行Hoechst 33342染色。若不需其它染色，则直接进行Hoechst 33342染色。
   （4）加入适量Hoechst 33342染色工作液重悬细胞，对于固定的组织和细胞，室温下避光孵育3-8 min；对于活细胞或培养的组织，于37℃避光孵育20-30 min。孵育完成后，吸除染色液。
   （5）加入PBS重悬细胞，以600×g、4℃离心5 min，弃上清。重复此步骤1-2次。
   （6）加入PBS重悬细胞，用于流式细胞术检测或制成细胞涂片后在荧光显微镜下检测。Ex=350 nm，Em=461 nm左右。

-20℃避光保存，一年有效。

1. Hoechst 33342属于荧光染料，光照易导致荧光淬灭，操作过程应注意避光，染色完成后应尽快检测实验结果。
2. 由于样本类型和实验环境的不同均会影响染色效率，建议通过预实验来优化Hoechst 33342工作液浓度和染色时间。
3. 本品仅适用于专业科研用途，严禁用于临床诊断、治疗、食品或药品领域，且不得存放于住宅等非专业场所。
4. 为保障操作安全与人员健康，操作时请务必穿戴实验服并佩戴一次性手套。