HL Assay Kit (Microanalysis)

肝酯酶水解α-乙酸萘酯产生α-萘酚，可与固蓝B盐形成紫红色偶氮化合物，在595nm有特征吸收峰，颜色深浅在一定范围内与肝酯酶活性成正相关。

100T/48S规格的产品组成及保存条件： 

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、天平、冷冻离心机、研钵、水浴锅。

二、样品处理
1.组织：按照质量（g）：CB0288M-A体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL CB0288M-A）加入CB0288M-A，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心10min，取上清待测。
2.细胞：按照细胞数量（10⁴个）：CB0288M-A体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL CB0288M-A）加入CB0288M-A，冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后于4℃，10000g离心10min，取上清待测。
3.血清：直接测定。

三、测定步骤：
1.分光光度计或酶标仪预热30 min，调节波长到595nm，蒸馏水调零。
2.样本测定（微量石英比色皿/96孔板中加入）：

四、HL酶活计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y= 0.1519 x -0.1241，R²=0.9994
1.按照蛋白浓度计算：
酶活性定义：每毫克蛋白每分钟水解α-乙酸萘酯产生1μmol α-萘酚为一个酶活力单位。
HL活性 (μmol /min/mg prot) = (△A+0.1241)÷0.1519×V反总÷(V样×Cpr)÷T =6.58×(△A+0.1241)÷Cpr
2.按照样本质量计算：
酶活性定义：每克组织每分钟水解α-乙酸萘酯产生1μmol α-萘酚为一个酶活力单位。
HL活性 (μmol /min/g 鲜重) = (△A+0.1241)÷0.1519×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T =6.58×(△A+0.1241)÷W
3.按照细胞数量计算：
酶活性定义：每10⁴个细胞每分钟水解α-乙酸萘酯产生1μmol α-萘酚为一个酶活力单位。
HL活性 (μmol /min/10⁴ cell) = (△A+0.1241)÷0.1519×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)÷T =6.58×(△A+0.1241)÷细胞数量
4.按照液体体积计算：
酶活性定义：每毫升血清每分钟水解α-乙酸萘酯产生1μmol α-萘酚为一个酶活力单位。
HL活性 (μmol /min/mL) = (△A+0.1241)÷0.1519×V反总÷V样÷T =6.58×(△A+0.1241)
注：V反总：反应总体积，0.2mL；V样：反应体系中加入样本体积，0.02mL；W：样本质量，g；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，10min。

b. 用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y= 0.076 x -0.1241，R²=0.9994
1.按照蛋白浓度计算：
酶活性定义：每毫克蛋白每分钟水解α-乙酸萘酯产生1μmol α-萘酚为一个酶活力单位。
HL活性 (μmol /min/mg prot) = (△A+0.1241)÷0.076×V反总÷(V样×Cpr)÷T = 13.16×(△A+0.1241)÷Cpr
2.按照样本质量计算：
酶活性定义：每克组织每分钟水解α-乙酸萘酯产生1μmol α-萘酚为一个酶活力单位。
HL活性 (μmol /min /g 鲜重) = (△A+0.1241)÷0.076×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T = 13.16×(△A+0.1241)÷W
3.按照细胞数量计算
酶活性定义：每10⁴个细胞每分钟水解α-乙酸萘酯产生1μmol α-萘酚为一个酶活力单位。
HL活性 (μmol /min /10⁴ cell) = (△A+0.1241)÷0.076×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)÷T = 13.16×(△A+0.1241)÷细胞数量
4.按照液体体积计算
酶活性定义：每毫升血清每分钟水解α-乙酸萘酯产生1μmol α-萘酚为一个酶活力单位。
HL活性 (μmol /min /mL) = (△A+0.1241)÷0.076×V反总÷V样÷T = 13.16×(△A+0.1241)
注：V反总：反应总体积，0.2mL；V样：反应体系中加入样本体积，0.02mL；W：样本质量，g；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，10min。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。