GO Assay Kit (Microanalysis)

乙醇酸氧化酶催化乙醇酸氧化生成乙醛酸，乙醛酸和盐酸苯肼反应生成乙醛酸苯腙，在324nm有特征吸收峰。

100T/96S规格的产品组成及保存条件：

正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、天平、低温离心机。

二、酶液提取：
按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL CB0305M-ES），进行冰浴匀浆。12000g， 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

三、测定步骤：
1.分光光度计预热30min，调节波长至324nm，蒸馏水调零。
2.取微量石英比色皿/96孔板中依次加入：

四、计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1.按照蛋白浓度计算
酶活性定义：每毫克蛋白每分钟氧化1nmol乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。
GO活性 (nmol/min /mg prot) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr)÷T = 392×ΔA÷Cpr
2.按照样本质量计算
酶活性定义：每克组织每分钟氧化1 nmol乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。
GO活性 (nmol/min /g 鲜重) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×W÷V样总)÷T = 392×ΔA÷W
注：ε：乙醛酸苯腙毫摩尔消光系数：17L/mmol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应总体积，0.2mL；V样：反应中样本体积，0.01mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W，样本质量，g；T：反应时间，3min。

b. 用96孔板测定的计算公式如下
1.按照蛋白浓度计算
酶活性定义：每毫克蛋白每分钟氧化1nmol乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。
GO活性 (nmol/min /mg prot) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr)÷T = 784×ΔA÷Cpr
2.按照样本质量计算
酶活性定义：每克组织每分钟氧化1nmol乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。
GO活性 (nmol/min /g 鲜重) = ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×W÷V样总)÷T = 784×ΔA÷W
注：ε：乙醛酸苯腙毫摩尔消光系数：17L/mmol/cm；d：比色皿光径，0.5cm；V反总：反应总体积，0.2mL；V样：反应中样本体积，0.01mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W，样本质量，g；T：反应时间，3min。

1.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。