Glutamic Acid Dehydrogenase Assay Kit (Microanalysis)

谷氨酸脱氢酶能够催化 α-酮戊二酸、NADH 和 NH₄⁺ 生成谷氨酸和 NAD⁺，NADH 在340 nm处具有特征吸收峰，通过测定 NADH 分解速率即可表征谷氨酸脱氢酶的活性。

100T/96S规格的产品组成及保存条件：

一、自备用品：
紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板（UV板）、水浴锅、研钵/匀浆器、台式离心机、可调式移液枪、冰和双蒸水。

二、粗酶液提取：
1.细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液CB0120M-ES，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2.组织：称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0120M-ES，进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3.血清（浆）样品：直接检测。

三、测定步骤：
1.紫外分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2.样本测定：
在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本和190μL工作液（需要现配），混匀，立即记录340nm处 20秒时的吸光值 A1和5分20秒后的吸光值 A2，计算 ΔA=A1-A2。

四、GDH 活性计算：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1.血清（浆）中 GDH 活力的计算：
单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GDH (nmol/min/mL) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹ ]÷V样÷T = 643×ΔA
2.组织、细菌或细胞中 GDH 活力的计算:
(1)按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GDH (U/mg prot) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹ ]÷(V样×Cpr)÷T = 643×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g 组织每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GDH (U/g 鲜重) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹ ]÷(W× V样÷V样总)÷T = 643×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞数量计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GDH (U/10⁴ cell) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹ ]÷(500×V样÷V样总)÷T =1.286×ΔA
注： V反总：反应体系总体积，2×10^-4 L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×10³ L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.01 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量(g)；500：细菌或细胞总数，500 万。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
1.血清（浆）中 GDH 活力的计算：
单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GDH (U/mL) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹ ]÷V样÷T = 1286×ΔA
2.组织、细菌或细胞中 GDH 活力的计算：
(1)按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GDH (U/mg prot) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹ ]÷(V样×Cpr)÷T = 1286×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GDH (U/g 鲜重) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹ ]÷(W ×V样÷V样总)÷T = 1286×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GDH (U/10⁴ cell) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹ ]÷(500×V样÷V样总)÷T =2.572×ΔA
注： V反总：反应体系总体积，2×10^-4 L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×10³ L /mol/cm；d：96 孔板光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.01 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量(g)；500：细菌或细胞总数，500 万。

1.测定过程中样本应保持冰上放置，以免变性和失活；
2.若∆A 大于 0.5，建议将粗酶液适当稀释后再进行测定，计算时相应修改；
3.提取液中含有约1 mg/mL的蛋白，测定样本蛋白浓度时需要减去提取液自身的蛋白含量。
4.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。