Glutamic Acid Dehydrogenase Assay Kit (UV Spectrophotometry)

GDH催化NH4 ⁺、α-酮戊二酸和NADH，生成谷氨酸和NAD⁺，引起340nm吸光度下降。通过测定340nm吸光度的下降速率，计算GDH活性。

50T/48S规格的产品组成及保存条件：

一、自备用品：
紫外分光光度计、1ml石英比色皿、水浴锅、可调式移液枪、离心机、冰和双蒸水。

二、粗酶液提取：
1.细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液CB0120UV-ES，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2.组织：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液CB0120UV-ES，进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3.血清（浆）样品：直接检测。

三、测定步骤：
1.紫外分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2.样本测定，
取 50μL 样本和 1mL 工作液（需要现配）于 1mL 比色皿中，混匀，加工作液的同时开始计时，在340 nm波长下记录 20 秒时的初始吸光度 A1 和 5 分 20 秒时的吸光度 A2，计算 ΔA=A1-A2。

四、GDH活性计算：
1.血清（浆）中 GDH 活力的计算：
单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GDH (U/mL) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹ ]÷V样÷T = 675×ΔA
2.组织、细菌或细胞中 GDH 活力的计算：
(1)按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GDH (U/mg prot) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹ ]÷(V样×Cpr)÷T = 675×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g 组织每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GDH (U/g 鲜重) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹ ]÷(W× V样÷V样总) ÷T = 675×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。
GDH (U/10 ⁴ cell) = [ΔA×V反总÷(ε×d)×10⁹ ]÷(V样÷V样总×500)÷T =1.35×ΔA
注： V反总：反应体系总体积，1.05×10^-3 L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×10³ L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.05 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量(g)；500：细菌或细胞总数，500 万。

1.当ΔA大于0.5时，将样本进行稀释后测量
2.由于提取液中含有一定浓度的蛋白（约1mg/mL），所以在测定样本蛋白浓度时需要减去提取液本身
的蛋白含量。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。