FDH Assay Kit (Microanalysis)

甲醛脱氢酶催化甲醛和NAD⁺产生NADH，在340nm处的吸光值会增加，测定340nm处的吸光值变化，可计算得到甲醛脱氢酶的活性。

100T/96S规格的产品组成及保存条件： 

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、恒温培养箱/水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

二、FDH提取：
1.组织：按照组织质量（g）：CB0076M-ES体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL CB0076M-ES）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃，离心20min。
2.细胞：按照细胞数量（104个）：CB0076M-ES体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL CB0076M-ES），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3.液体：直接检测。

三、测定步骤：
1.紫外分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至340nm。
2.操作表（在96孔板中加入如下试剂）：

四、FDH活性计算：
1.按蛋白浓度计算：
酶活定义：每毫克蛋白每分钟催化还原1nmol NAD+的酶量为1个酶活单位。
FDH酶活 (nmol/min/mg prot) = △A×V反总÷(ε×d)÷(V样×Cpr) ÷T = 643×△A÷Cpr
2.按样本质量计算：
酶活定义：每克样品每分钟催化还原1nmol NAD+的酶量为1个酶活单位。
FDH酶活 (nmol/min/g 鲜重) = △A×V反总÷(ε×d)÷(V样×W÷V样总)÷T = 643×△A÷W
3.按照细胞数量计算：
酶活定义：每10⁴个细胞每分钟催化还原1nmol NAD+的酶量为1个酶活单位。
FDH酶活 (nmol/min/10⁴cell) = △A×V反总÷(ε×d)÷(V样÷V样总×细胞数量(万个)÷T = 643×△A÷细胞数量
4.按液体体积计算：
酶活定义：每mL样本每分钟催化还原1nmol NAD+的酶量为1个酶活单位。
FDH酶活 (nmol/min/mL) = △A×V反总÷(ε×d) ÷V样÷T = 643×△A
注：ε：NADH微摩尔消光系数，6.22×10^-3 L/µmol/cm；d：96孔板光径，0.5cm；V反总：反应体系总体积，0.2mL；V样：反应体系中样本体积，0.02mL；V样总：加入CB0076M-ES体积，1mL；T，反应时间，5min；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。