Name: FDH Assay Kit (UV Spectrophotometry)
Brand: TargetMol
SKU: CB0076UV
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规格

价格

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数量

50 T

¥ 770

10-12日内发货

产品规格

50T/48S规格的产品组成及保存条件：

编号	规格	储存条件
CB0076UV-ES	60 mL×1瓶	4℃保存；
CB0076UV-A	30 mL×1瓶	4℃保存；
CB0076UV-B	粉剂×1瓶	-20℃保存；临用前加入15mL水溶解待用，剩余试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
CB0076UV-C	粉剂×1瓶	4℃保存；临用前加入3mL水溶解待用。
CB0076UV-D	3mL×1瓶	4℃避光保存；

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

操作说明

一、自备用品：
紫外分光光度计、低温离心机、恒温培养箱/水浴锅、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

二、FDH提取：
1.组织：按照组织质量（g）：CB0076UV-ES体积（mL）为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL CB0076UV-ES）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃，离心20min。
2.细胞：按照细胞数量（104个）：CB0076UV-ES体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL CB0076UV-ES），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3.液体：直接检测。

三、测定步骤：
1.分光光度计预热30min，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2.操作表（在比色皿中加入如下试剂）：

试剂名称	测定管（µL）
样本	100
CB0076UV-A	550
CB0076UV-B	250
CB0076UV-C	50
CB0076UV-D	50
混匀，于340nm下测定初始吸光值A1与5min后的吸光值A2，△A=A2-A1。注：若样本数量较多，可将试剂按比例配成工作液使用。

四、FDH活性计算：
1.按蛋白浓度计算：
酶活定义：每毫克蛋白每分钟催化还原1nmol NAD+的酶量为1个酶活单位。
FDH酶活 (nmol/min/mg prot) = △A×V反总÷(ε×d)÷(V样×Cpr) ÷T = 322×△A÷Cpr
2.按样本质量计算：
酶活定义：每克样品每分钟催化还原1nmol NAD+的酶量为1个酶活单位。
FDH酶活 (nmol/min/g 鲜重) = △A×V反总÷(ε×d)÷(V样×W÷V样总)÷T = 322×△A÷W
3.按照细胞数量计算：
酶活定义：每10⁴个细胞每分钟催化还原1nmol NAD+的酶量为1个酶活单位。
FDH酶活 (nmol/min/10⁴cell) = △A×V反总÷(ε×d)÷(V样÷V样总×细胞数量(万个)÷T = 322×△A÷细胞数量
4.按液体体积计算：
酶活定义：每mL样本每分钟催化还原1nmol NAD+的酶量为1个酶活单位。
FDH酶活 (nmol/min/mL) = △A×V反总÷(ε×d) ÷V样÷T = 322×△A
注：ε：NADH微摩尔消光系数，6.22×10^-3 L/µmol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应体系总体积，1mL；V样：反应体系中样本体积，0.1mL；V样总：加入CB0076UV-ES体积，1mL；T，反应时间，5min；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g。