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规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
---|---|---|---|
50 T | ¥ 5,880 | 4-6日内发货 |
脂肪酸合成酶催化乙酰 CoA、丙二酰 CoA 和 NADPH 生成长链脂肪酸和 NADP+;NADPH 在 340nm 有吸收峰,而 NADP+没有;通过测定 340nm 光吸收下降速率,计算 FAS 活性。
50T/48S规格的产品组成如下:
组成 | 规格 | 储存条件 |
CB0071S-A | 50mL×1 瓶 | -20℃保存;用前1天取出置于 4℃充分解冻后混匀。 |
CB0071S-B | 粉剂×1 瓶 | 4℃保存;临用前加入 1100μL CB0071S-D,充分溶解。 |
CB0071S-C | 粉剂×1 瓶 | 4℃保存;临用前加入 1100μL CB0071S-D,充分溶解。 |
CB0071S-D | 50mL×1 瓶 | 4℃保存。 |
CB0071S-E | 粉剂×1 瓶 | 4℃保存;临用前加入 2100μL CB0071S-D,充分溶解。 |
注:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
一、自备用品:
研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1mL 石英比色皿、可调式移液枪和蒸馏水。
二、粗酶提取:
三、测定步骤:
试剂名称 | 空白管 (μL) | 测定管 (μL) |
蒸馏水 | 100 | |
CB0071S-B | 20 | |
CB0071S-C | 20 | |
CB0071S-D | 820 | |
CB0071S-E | 40 | |
迅速混匀后340nm 处测定吸光值,记录第 30s 和 90s 时吸光值, 分别记录为 A1 和 A2。△A 空=A1-A2。 | ||
上清液 | 100 | |
CB0071S-B | 20 | |
CB0071S-C | 20 | |
CB0071S-D | 820 | |
CB0071S-E | 40 | |
迅速混匀后于 340nm 处测定吸光值,记录第 30s 和 90s 时吸光值,分别记录为 A1 和 A2。△A 测=A3-A4。 |
注:空白管只需要测定1次。
四、FAS活性计算公式:
活性单位定义:37℃中每毫克蛋白每分钟氧化 1 μmol NADPH 为 1 个酶活单位。
FAS (μmol/min/mg prot) = [(△A 测定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×106]÷(Cpr×V 样)÷T
=1.61×(△A 测定管–△A 空白管) ÷Cpr
2. 按照样本质量计算
活性单位定义:37℃中每克组织每分钟氧化 1 μmol NADPH 为 1 个酶活单位。
FAS (μmol/min/g) = [(△A 测定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×106]÷(W×V 样÷V 样总)÷T
=1.61×(△A 测定管–△A 空白管) ÷W
3. 按细胞数量计算
活性单位定义:37℃中每 104 个细胞每分钟氧化 1 μmol NADPH 为 1 个酶活单位。
FAS (μmol/min/104cell) = [(△A 测定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×106]÷(细胞数量×V 样÷V 样 总)÷T
=1.61×(△A 测定管–△A 空白管) ÷细胞数量
4. 按液体体积计算
活性单位定义:37℃中每毫升样本每分钟氧化 1 μmol NADPH 为 1 个酶活单位。
FAS (μmol/min/mL) = [(△A 测定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×106]÷V 样÷T
=1.61×(△A 测定管–△A 空白管)
注: ε:NADPH 摩尔消光系数,6.22×103/mol/cm;d:比色皿光径,1 cm;V 反总:反应体系总体积,1000μL=0.001 L;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;V 样:加入反应体系中上清液体积,100μL=0.1 mL;T:反应时间,1min。
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