Fatty Acid Synthase Assay Kit (Microanalysis)

脂肪酸合成酶催化乙酰 CoA、丙二酰 CoA 和 NADPH 生成长链脂肪酸和 NADP+；NADPH 在 340nm 有吸收峰，而 NADP+ 没有；通过测定 340nm 光吸收下降速率，计算 FAS 活性。

100T/96S规格的产品组成如下：

注：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、可调式移液枪和蒸馏水。
二、粗酶提取：

1. 组织：按照组织质量（g）：CB0071M-A体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0071M-A）进行冰浴匀浆。16000rpm，4℃离心 40min，取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴ 个）：CB0071M-A体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL CB0071M-A），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 16000rpm，4℃，离心 40min，取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体：直接测定。

三、测定步骤：

1. 分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长到 340 nm，蒸馏水调零。
2. CB0071M-D置于 40℃水浴中预热 30 min。
3. 在 1mL 石英比色皿中依次加入下列试剂：

注：空白管只需要测定1次。
四、FAS活性计算公式：
a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1. 按照蛋白浓度计算

活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟氧化 1 μmol NADPH 为 1 个酶活单位。
FAS (μmol/min/mg prot) = [(△A 测定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×10⁶]÷(Cpr×V 样)÷T
=1.61×(△A 测定管–△A 空白管) ÷Cpr
2. 按照样本质量计算

活性单位定义：37℃中每克组织每分钟氧化 1 μmol NADPH 为 1 个酶活单位。
FAS (μmol/min/g) = [(△A 测定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×10⁶]÷(W×V 样÷V 样总)÷T
=1.61×(△A 测定管–△A 空白管) ÷W
3. 按细胞数量计算

活性单位定义：37℃中每 10⁴ 个细胞每分钟氧化 1 μmol NADPH 为 1 个酶活单位。
FAS (μmol/min/10⁴cell) = [(△A 测定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×10⁶]÷(细胞数量×V 样÷V 样 总)÷T
=1.61×(△A 测定管–△A 空白管) ÷细胞数量
4. 按液体体积计算

活性单位定义：37℃中每毫升样本每分钟氧化 1 μmol NADPH 为 1 个酶活单位。
FAS (μmol/min/mL) = [(△A 测定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×10⁶]÷V 样÷T
=1.61×(△A 测定管–△A 空白管)
注： ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×10³ L/mol/cm；d：比色皿光径，1 cm；V 反总：反应体系总体积，200μL=2×10^-4 L；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W ：样品质量；V 样：加入反应体系中上清液体积，20μL=0.02 mL；V 样总：提取液体积，1 mL；T：反应时间，1min。
b. 使用 96 孔板测定的计算公式如下

1. 按照蛋白浓度计算

活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟氧化 1μmol NADPH 为 1 个酶活单位。
FAS (μmol/min/mg prot) = [(△A 测定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×10⁶]÷(Cpr×V 样)÷T
=3.22×(△A 测定管–△A 空白管) ÷Cpr
2. 按照样本质量计算

活性单位定义：37℃中每克组织每分钟氧化 1μmol NADPH 为 1 个酶活单位。
FAS (μmol/min/g) = [(△A 测定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×10⁶]÷(W×V 样÷V 样总)÷T
=3.22×(△A 测定管–△A 空白管)÷W
3. 按细胞数量计算

活性单位定义：37℃中每 10⁴ 个细胞每分钟氧化 1μmol NADPH 为 1 个酶活单位。
FAS (μmol /min/10⁴cell) = [(△A 测定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×106]÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T
= 3.22×(△A 测定管–△A 空白管) ÷细胞数量
4. 按液体体积计算

活性单位定义：37℃中每毫升样本每分钟氧化 1μmol NADPH 为 1 个酶活单位。
FAS (μmol /min/mL) = [(△A 测定管–△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×106]÷V 样÷T
=3.22×(△A 测定管–△A 空白管)
注： ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×10³ L/mol/cm；d：96 孔板光径，0.5 cm；V 反总：反应体系总体积，200μL=2×10^-4 L；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W ：样品质量；V 样：加入反应体系中上清液体积，20μL=0.02 mL；V 样总：提取液体积，1 mL；T：反应时间，1min。

1. 配制好的试剂 4℃保存，三天内使用完。
2. 蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
3. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。