Ethanol Assay Kit (Visible Spectrophotometry)

乙醇在乙醇脱氢酶的催化下氧化脱氢生成乙醛，同时，NAD被还原生成NADH，NADH在1-mPMS的作用下使WST-8显橙黄色，通过450 nm下测定吸光值变化可测得乙醇含量。

50T/48S规格的产品组成如下：

注：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计、低温离心机、恒温培养箱/水浴锅、可调式移液器、研钵/匀浆器、1mL 玻璃比色皿、冰和蒸馏水。
二、FDH提取：

1. 组织：按照组织质量（g）：蒸馏水体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL蒸馏水），进行匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清待测。
2. 血清（浆）等液体样品：直接测定。

三、测定步骤：

1. 分光光度计预热 30min以上，调节波长至450nm。
2. 临用前按照样本数量，按以下比例配制工作液：CB0070V-A ：CB0070V-B ：CB0070V-D = 10 : 5 : 1。
3. 样本测定（按下表在比色杯中加入如下试剂）：

注：空白管、标准管只需做 1-2 管
四、乙醇含量计算：

1. 按样本质量计算
   乙醇含量（mmol /g 质量）=（ΔA 测定-ΔA 空白）×C 标准÷（ΔA 标准-ΔA 空白）×V 样÷(V 样÷V 样总×W) ×F
   =0.5×（ΔA 测定-ΔA 空白）÷（ΔA 标准-ΔA 空白）÷W×F
2. 按液体体积计算

乙醇含量（mmol /L）=0.5×（ΔA 测定-ΔA 空白）×C 标准÷（ΔA 标准-ΔA 空白）×F
注：C 标准：标准管浓度，0.5mmol/L；V 样总：上清液总体积，1mL；V 样：加入反应体系中上清液体积，200μL=0.2mL；W：样本质量，g；F：稀释倍数。

1. 如果测定吸光值 ΔA＞0.6，建议稀释样本后再测定，计算公式中乘以稀释倍数；如果测定吸光值较低或接近空白 OD 值，建议增加样本的加入量或者延长反应时间后再进行测定。
2. 建议一次测定不要测定过多样本以免耽误过多的酶促反应时间。
3. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。