ERND Assay Kit (Spectrophotometry)

ERND催化红霉素释放甲醛，通过Nash比色测定甲醛含量，即可计算出ERND活性。

50T/24S规格的产品组成如下：

注：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、普通离心机，超速离心机、可调式移液枪、蒸馏水和冰。
二、粗酶液提取：

1. 除去细胞核和线粒体等大分子物质：称约0.5g组织，加入1mL 4℃预冷的CB0069S-A，冰上充分研磨，10 000g 4℃离心30min，取上清液转入超速离心管。
2. 粗制微粒体：4℃，100 000g，离心60min，弃上清液。
3. 除血红蛋白等杂质：向步骤2的沉淀中加1mL CB0069S-A，盖紧后充分震荡溶解，100 000g离心30min，弃上清液。
4. 最终微粒体：向步骤3的沉淀中加CB0069S-B 0.5mL，盖紧后充分震荡溶解，4℃保存待测。
5. 该待测液需当天使用。

三、测定步骤：

1. 分光光度计预热30 min以上，调节波长到412 nm，蒸馏水调零。
2. CB0069S-B在37℃水浴中预热30min。
3. 取1.5mL EP管依次加入下列试剂：

注：每个样品都需要做对照管。
四、ERND活性计算公式：

1. 按蛋白浓度计算
   活性单位定义：37℃下，每分钟每毫克蛋白催化产生1nmol甲醛为1个酶活单位。
   ERND活性 (nmol/min/mg prot)
   = C 标准品×V 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷A 标准管×稀释倍数÷(Cpr×V 样)÷T
   = 45×(A 测定管-A 对照管)÷A 标准管÷Cpr
2. 按样本鲜重计算
   活性单位定义：37℃下，每分钟每克样品催化产生1nmol甲醛为1个酶活单位。
   ERND活性(nmol/min/g 鲜重)
   = C 标准品×V 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷A 标准管×稀释倍数÷(W×V 样)÷T
   = 45×(A 测定管-A 对照管)÷A 标准管÷W
   注：C 标准品：0.05 mmol/L=50μmol/L；V 标准品：500μL=0.0005 L；稀释倍数：V 反总÷V上清液=(50+850 +50+50+175+175)÷500=2.7；Cpr：粗酶液蛋白质浓度，mg/mL，需要另外测定；V 样：加入粗酶液体积，50μL=0.05mL；W：样本质量，g；T：催化反应时间，30min。

1. 蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。