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100 T

¥ 1,814

10-12日内发货

产品组成

100T/48S规格的产品组成如下：

组成	规格	储存条件
CB0069M-A	粉剂×1瓶	4℃保存；临用前加100mL蒸馏水充分溶解。
CB0069M-B	液体×1瓶	4℃保存。
CB0069M-C	粉剂×1瓶	4℃保存；临用前加入1mL蒸馏水，充分溶解。
CB0069M-D	粉剂×1瓶	4℃保存；临用前加入0.5mL蒸馏水，充分溶解。
CB0069M-E	粉剂×1瓶	4℃保存；临用前加蒸馏水4.5mL充分溶解。
CB0069M-F	液体×1瓶	4℃保存。
CB0069M-G	液体×1瓶	4℃保存。
CB0069M-S	液体×1瓶	-20℃保存。临用前取CB0069M-S 10μL+ 990μL蒸馏水，混匀即为0.05mmol/L标准甲醛溶液，4℃保存。

注：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

操作说明

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、普通离心机，超速离心机、可调式移液枪、蒸馏水和冰。
二、粗酶液提取：

除去细胞核和线粒体等大分子物质：称约0.5g组织，加入1mL 4℃预冷的CB0069M-A，冰上充分研磨，10 000g 4℃离心30min，取上清液转入超速离心管。
粗制微粒体：4℃，100 000g，离心60min，弃上清液。
除血红蛋白等杂质：向步骤2的沉淀中加1mL CB0069M-A，盖紧后充分震荡溶解，100 000g离心30min，弃上清液。
最终微粒体：向步骤3的沉淀中加CB0069M-B 0.5mL，盖紧后充分震荡溶解，4℃保存待测。
该待测液需当天使用。

三、测定步骤：

分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到412nm，蒸馏水调零。
CB0069M-B在37℃水浴中预热30min。
取1.5mL EP管依次加入下列试剂：

试剂名称	对照管 (μL)	测定管 (μL)	标准管 (μL)
粗酶液	10	250
CB0069M-B	170	170
CB0069M-C	10	10
CB0069M-D		10
蒸馏水	10
混匀后37℃水浴中保温30min；立即加入。
CB0069M-E	35	35
混匀后置于冰浴中5min；取出后加入。
CB0069M-F	35	35
混匀后室温静置5min；室温8000rpm离心5min；取上清液加入新的1.5mL EP管。
上清液	100	100
标准品			100
CB0069M-G	100	100	100
混匀后60℃水浴10min，然后取出，用冷水冷却5min，于412nm测定光吸收，记为A 对照管、A 测定管、A 标准管。

注：每个样品都需要做对照管。
四、ERND活性计算公式：

按蛋白浓度计算

活性单位定义：37℃下，每分钟每毫克蛋白催化产生1nmol甲醛为1个酶活单位。
ERND活性 (nmol/min/mg prot)
= C 标准品×V 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷A 标准管×稀释倍数÷(Cpr×V 样)÷T
= 45×(A 测定管-A 对照管)÷A 标准管÷Cpr
2. 按样本鲜重计算

活性单位定义：37℃下，每分钟每克样品催化产生1nmol甲醛为1个酶活单位。
ERND活性(nmol/min/g 鲜重)
= C 标准品×V 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷A 标准管×稀释倍数÷(W×V 样)÷T
= 45×(A 测定管-A 对照管)÷A 标准管÷W
注：C 标准品：0.05mmol/L=50μmol/L；V 标准品：100μL=1×10^-4 L；稀释倍数：V 反总÷V上清液=(50+850 +50+50+175+175)÷500=2.7；Cpr：粗酶液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定；W：样品质量，g；V 样：加入粗酶液体积，10μL=0.01mL；T：催化反应时间（min），30min。

注意事项