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DHA Assay Kit (Microanalysis)

DHA Assay Kit (Microanalysis)

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DHA Assay Kit (Microanalysis)
产品编号 CB0067M
别名 脱氢酶活性检测试剂盒(微量法)
规格价格库存数量
100 T
¥ 1,296
10-12日内发货
大包装 & 定制
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TargetMol 的所有产品仅用作科学研究或药证申报,不能被用于人体,我们不向个人提供产品和服务。请您遵守承诺用途,不得违反法律法规规定用于任何其他用途。
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Handling Instruction | TargetMol 检测原理

在细胞呼吸过程中,氢受体2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC)在脱氢酶作用下接受氢以后,被还原为三苯基甲鐟(Triphenyl Formazone, TF),TF呈现红色,于485nm测定其吸光值,即得脱氢酶活性。

Handling Instruction | TargetMol 产品组成

100T/96S规格的产品组成如下:

组成 规格 储存条件
CB0067M-ES 100mL×1瓶 4℃保存。
CB0067M-A 粉剂×1瓶 使用前加10mL CB0067M-B溶解,4℃避光保存(尽量现配现用)。
CB0067M-B 20mL×1瓶 4℃保存。
CB0067M-C 甲醇 自备,室温保存。

注:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

Handling Instruction | TargetMol 操作说明

一、自备用品:
可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、筛子、天平、恒温培养箱或水浴锅、低温离心机、冰、蒸馏水、甲醇(不允许快递,请用户自备)。
二、粗酶液提取:

  1. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL CB0067M-ES),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
  2. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL CB0067M-ES)进行冰浴匀浆,然后8000g,4℃,离心20min。
  3. 液体:直接检测。

三、测定步骤:

  1. 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至485nm。
  2. 样本测定:在微量石英比色皿/96孔板中加入下列试剂:
试剂名称 空白管 (μL) 测定管 (μL)
样品 100
蒸馏水 100
CB0067M-A 100
CB0067M-B 100
充分混匀,37℃培养24h。
CB0067M-C 900 900
振荡1h,8000g,25℃,离心5min,取200μL上清于微量石英比色皿/96孔板,测定A485,△A=A 测定-A 空白管。

注:空白管只需测定一次。
四、脱氢酶活力计算公式:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线:y = 0.0422x - 0.0312;R2 = 0.9988;x为标准品浓度(μg/mL),y为吸光值。

  1. 按照蛋白浓度计算

酶活单位定义:在37℃时,每mg蛋白样品每min催化产生1μgTF为一个酶活性单位。
DHA (μg/ min / mg prot) = (△A+0.0312)÷0.0422×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T = 0.181×(△A+0.0312)÷Cpr
2. 按样本质量计算

酶活单位定义:在37℃时,每克样品每min催化产生1μgTF为一个酶活性单位。
DHA (μg/ min/g 鲜重) = (△A+0.0312)÷0.0422×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T = 0.181×(△A+0.0312)÷W
3. 按液体体积计算

酶活单位定义:在37℃时,每mL样本每min催化产生1μgTF为一个酶活性单位。
DHA (μg/min/mL) = (△A+0.0312)÷ 0.0422×V 反总÷V 样÷T = 0.181×(△A+0.0312)
注:V 反总:反应总体积,1.1mL;V 样:加入反应体系中样本体积,0.1mL;T:培养时间,1d=1440min;W:样品质量,g;Cpr:蛋白浓度,mg/mL。
b. 用96孔板测定的计算公式如下

标准曲线:y = 0.0211x - 0.0312;R2 = 0.9988;x为标准品浓度(μg/mL),y为吸光值。

  1. 按蛋白含量计算

酶活单位定义:在37℃时,每mg蛋白样品每min催化产生1μgTF为一个酶活性单位。
DAO活性(nmol/min/mg prot) = ΔA÷(ε×d)×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T = 228×ΔA÷Cpr
2. 按样本质量计算

酶活定义:37℃,pH7.6时,每克样品1min内转化1nmol底物的酶量为一个酶活单位。
DHA (μg/min/mg prot) = (△A+0.0312)÷0.0211×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T = 0.362×(△A+0.0312)÷Cpr
3. 按液体体积计算

酶活单位定义:在37℃时,每mL样本每min催化产生1μgTF为一个酶活性单位。
DHA (μg/min/mL) = (△A+0.0312)÷0.0211×V 反总÷V 样÷T = 0.362×(△A+0.0312)
注:V 反总:反应总体积,1.1mL;V 样:加入反应体系中样本体积,0.1mL;T:培养时间,1d=1440min;W:样品质量,g;Cpr:蛋白浓度,mg/mL。

Handling Instruction | TargetMol 注意事项

  1. 配制好的试剂避光保存于4℃,最好在一周内使用,若出现红色,则不能使用。
  2. 蛋白定量测定,建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
  3. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
  4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。