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规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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100 T | ¥ 1,296 | 10-12日内发货 |
在细胞呼吸过程中,氢受体2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC)在脱氢酶作用下接受氢以后,被还原为三苯基甲鐟(Triphenyl Formazone, TF),TF呈现红色,于485nm测定其吸光值,即得脱氢酶活性。
100T/96S规格的产品组成如下:
组成 | 规格 | 储存条件 |
CB0067M-ES | 100mL×1瓶 | 4℃保存。 |
CB0067M-A | 粉剂×1瓶 | 使用前加10mL CB0067M-B溶解,4℃避光保存(尽量现配现用)。 |
CB0067M-B | 20mL×1瓶 | 4℃保存。 |
CB0067M-C | 甲醇 | 自备,室温保存。 |
注:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
一、自备用品:
可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、筛子、天平、恒温培养箱或水浴锅、低温离心机、冰、蒸馏水、甲醇(不允许快递,请用户自备)。
二、粗酶液提取:
三、测定步骤:
试剂名称 | 空白管 (μL) | 测定管 (μL) |
样品 | 100 | |
蒸馏水 | 100 | |
CB0067M-A | 100 | |
CB0067M-B | 100 | |
充分混匀,37℃培养24h。 | ||
CB0067M-C | 900 | 900 |
振荡1h,8000g,25℃,离心5min,取200μL上清于微量石英比色皿/96孔板,测定A485,△A=A 测定-A 空白管。 |
注:空白管只需测定一次。
四、脱氢酶活力计算公式:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.0422x - 0.0312;R2 = 0.9988;x为标准品浓度(μg/mL),y为吸光值。
酶活单位定义:在37℃时,每mg蛋白样品每min催化产生1μgTF为一个酶活性单位。
DHA (μg/ min / mg prot) = (△A+0.0312)÷0.0422×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T = 0.181×(△A+0.0312)÷Cpr
2. 按样本质量计算
酶活单位定义:在37℃时,每克样品每min催化产生1μgTF为一个酶活性单位。
DHA (μg/ min/g 鲜重) = (△A+0.0312)÷0.0422×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T = 0.181×(△A+0.0312)÷W
3. 按液体体积计算
酶活单位定义:在37℃时,每mL样本每min催化产生1μgTF为一个酶活性单位。
DHA (μg/min/mL) = (△A+0.0312)÷ 0.0422×V 反总÷V 样÷T = 0.181×(△A+0.0312)
注:V 反总:反应总体积,1.1mL;V 样:加入反应体系中样本体积,0.1mL;T:培养时间,1d=1440min;W:样品质量,g;Cpr:蛋白浓度,mg/mL。
b. 用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.0211x - 0.0312;R2 = 0.9988;x为标准品浓度(μg/mL),y为吸光值。
酶活单位定义:在37℃时,每mg蛋白样品每min催化产生1μgTF为一个酶活性单位。
DAO活性(nmol/min/mg prot) = ΔA÷(ε×d)×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T = 228×ΔA÷Cpr
2. 按样本质量计算
酶活定义:37℃,pH7.6时,每克样品1min内转化1nmol底物的酶量为一个酶活单位。
DHA (μg/min/mg prot) = (△A+0.0312)÷0.0211×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T = 0.362×(△A+0.0312)÷Cpr
3. 按液体体积计算
酶活单位定义:在37℃时,每mL样本每min催化产生1μgTF为一个酶活性单位。
DHA (μg/min/mL) = (△A+0.0312)÷0.0211×V 反总÷V 样÷T = 0.362×(△A+0.0312)
注:V 反总:反应总体积,1.1mL;V 样:加入反应体系中样本体积,0.1mL;T:培养时间,1d=1440min;W:样品质量,g;Cpr:蛋白浓度,mg/mL。
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