采用3，5-二硝基水杨酸法测定DBE催化支链淀粉产生的还原糖，通过测定还原糖含量的变化来计算DBE活性。

50T/24S规格的产品组成如下：

组成	规格	储存条件
CB0064S-ES	60mL×1瓶	4℃保存。
CB0064S-A	15mL×1瓶	4℃保存。
CB0064S-B	粉剂×1支	4℃保存；临用前每支加入10mL CB0064S-A，充分混匀后备用；剩余试剂4℃保存。
CB0064S-C	12mL×1瓶	4℃保存。
CB0064S-D	35mL×1瓶	4℃保存。
CB0064S-Standard	粉剂×1支	临用前加入 1mL 蒸馏水溶解，配成 10mg/mL 溶液；4℃保存。

注：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水。

二、粗酶液提取：
按照组织质量（g）：提取液CB0064S-ES体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL CB0064S-ES），进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

三、测定步骤：
1.分光光度计预热30min以上，调节波长到540nm，蒸馏水调零。
2.将 10 mg/mL 标准液用蒸馏水稀释为 1、0.8、0.6、0.4、0.2mg/mL 的标准溶液备用。
3.样本测定（在EP管中加入下列试剂）：

试剂名称	对照管 (μL)		测定管 (μL)		标准管 (μL)			空白管 (μL)
95℃水浴5min后灭活的样本	200		200
粗酶液					200		200
标准溶液
蒸馏水
CB0064S-A	200		200
CB0064S-B					200		200
混匀，37℃准确保温2h。
CB0064S-C		200		200		200		200
CB0064S-D		600		600		600		600
混匀，95℃水浴5min，于1mL玻璃比色皿540nm处读取各管吸光值，分别记为 A 对照管，A 测定管，A 标准管，A 空白管。计算 ΔA=A 测定管-A 对照管，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。

注： 1.可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液，然后集中进行5min 95℃沸水浴处理。 2.每个测定管需设一个对照管（空白管和标准曲线只需检测 1-2 次）。

四、DBE活力单位的计算：
标准曲线的绘制：

以各个标准溶液的浓度为 x 轴，其对应的 ΔA 标准为 y 轴，绘制标准曲线，得到标准方程 y=kx+b，将 ΔA 带入方程得到 x（mg/mL）。
DBE 活性的计算：
1.按蛋白浓度计算

    酶活定义：每毫克蛋白每小时分解支链淀粉产生 1mg 葡萄糖为 1 个酶活力单位。 

DBE 酶活（U/mg prot）=x×V 提取÷（V 提取×Cpr）÷T=0.5x×Cpr
2.按样本质量计算

酶活定义：每克样本每小时分解支链淀粉产生 1mg 葡萄糖为 1 个酶活力单位。
DBE 酶活（U/g 质量）=x×V 提取÷W÷T=0.5x÷W
3.按细胞或细菌数量计算

酶活定义：每 104 个细胞每小时分解支链淀粉产生 1mg 葡萄糖为 1 个酶活力单位。
DBE 酶活（U/104 cell）=x×V 提取÷细胞数量（万个）÷T=0.5x÷细胞数量（万个）
4.按液体体积计算

酶活定义：每 mL 样本每小时分解支链淀粉产生 1mg 葡萄糖为 1 个酶活力单位。
DBE 酶活（U/mL）=x×V 样÷V 样÷T=0.5x
注：V 提取：提取液CB0064S-ES体积，1mL；V 样：加入的样本体积，0.2mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL，蛋白浓度自行测定；W：样本质量，g；T：反应时间：2h。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• CB0064S-淀粉脱分支酶活性检测试剂盒（分光光度法）-中文(244 KB)