- 全部删除
- 您的购物车当前为空
规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
---|---|---|---|
100 T | ¥ 2,030 | 4-6日内发货 |
采用3,5-二硝基水杨酸法测定DBE催化支链淀粉产生的还原糖,通过测定还原糖含量的变化来计算DBE活性。
100T/48S规格的产品组成如下:
组成 | 规格 | 储存条件 |
CB0064M-ES | 100mL×1瓶 | 4℃保存。 |
CB0064M-A | 15mL×1瓶 | 4℃保存。 |
CB0064M-B | 粉剂×1支 | 4℃保存;临用前加入10mL CB0064M-A,充分混匀后备用;剩余试剂4℃保存。 |
CB0064M-C | 12mL×1瓶 | 4℃保存。 |
CB0064M-D | 35mL×1瓶 | 4℃保存。 |
CB0064M-Standard | 粉剂×1支 | 临用前加入 1mL 蒸馏水溶解,配成 10mg/mL 溶液;4℃保存。 |
注:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
一、自备用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、蒸馏水。
二、粗酶液提取:
按照组织质量(g):提取液CB0064M-ES体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL CB0064M-ES),进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
三、测定步骤:
试剂名称 | 对照管 (μL) | 对照管 (μL) | 测定管 (μL) | 测定管 (μL) | ||||||
95℃水浴5min后灭活的样本 | 100 | 100 | ||||||||
粗酶液 | 100 | 100 | ||||||||
标准溶液 | ||||||||||
蒸馏水 | ||||||||||
CB0064M-A | 100 | 100 | ||||||||
CB0064M-B | 100 | 100 | ||||||||
混匀,37℃准确保温2h。 | ||||||||||
CB0064M-C | CB0064M-C | 100 | 100 | 100 | ||||||
CB0064M-D | CB0064M-D | 300 | 300 | 300 | ||||||
混匀,95℃水浴5min,取200μL至微量石英比色皿或96孔板中,540nm处读取各管吸光值A,分别记为 A 对照管,A 测定管,A 标准管,A 空白管。计算 ΔA=A 测定管-A 对照管,ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。 |
注:1. 可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液,然后集中进行5min 95℃沸水浴处理。
2. 每个测定管需设一个对照管(空白管和标准曲线只需检测 1-2 次)。
四、DBE活力单位的计算:
标准曲线的绘制:
以各个标准溶液的浓度为 x 轴,其对应的 ΔA 标准为 y 轴,绘制标准曲线,得到标准方程 y=kx+b,将 ΔA 带入方程得到 x(mg/mL)。
DBE 活性的计算:
酶活定义:每毫克蛋白每小时分解支链淀粉产生 1mg 葡萄糖为 1 个酶活力单位。
DBE 酶活(U/mg prot)=x×V 提取÷(V 提取×Cpr)÷T=0.5x×Cpr
2. 按样本质量计算
酶活定义:每克样本每小时分解支链淀粉产生 1mg 葡萄糖为 1 个酶活力单位。
DBE 酶活(U/g 质量)=x×V 提取÷W÷T=0.5x÷W
3. 按细胞或细菌数量计算
酶活定义:每 104 个细胞每小时分解支链淀粉产生 1mg 葡萄糖为 1 个酶活力单位。
DBE 酶活(U/104 cell)=x×V 提取÷细胞数量(万个)÷T=0.5x÷细胞数量(万个)
4. 按液体体积计算
酶活定义:每 mL 样本每小时分解支链淀粉产生 1mg 葡萄糖为 1 个酶活力单位。
DBE 酶活(U/mL)=x×V 样÷V 样÷T=0.5x
注:V 提取:提取液CB0064M-ES体积,1mL;V 样:加入的样本体积,0.1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL,蛋白浓度自行测定;W:样本质量,g;T:反应时间:2h。
版权所有©2015-2025 TargetMol Chemicals Inc.保留所有权利.
沪ICP备20019793号-4 | 沪公网安备 31010602006700号 | 沪(静)应急管危经许[2024]203441