CYB5 Assay Kit (Visible Spectrophotometry)

Name: CYB5 Assay Kit (Visible Spectrophotometry)
Brand: TargetMol
SKU: CB0062V
Rating: 5 (4 reviews)

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产品编号 CB0062V

别名 细胞色素b5检测试剂盒（可见分光光度法）

细胞色素P450酶是一组主要存在于肝脏的同工酶，在外源物质代谢中具有重要作用，尤其是药物和毒物的代谢。细胞色素P450和细胞色素b5（Cytochrome b5, CYB5）是P450酶系的两个血红素蛋白，其比值的变化与P450代谢活性密切相关。

规格	价格	库存	数量
50 T	¥ 495	10-12日内发货

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实验操作小课堂

常见问题解答

检测原理

氧化型细胞色素b5经连二亚硫酸钠还原后，在424nm处有最大吸收峰，通过测定424nm和490nm处吸光值的差异，即可计算出细胞色素b5的含量。

产品组成

50T/48S规格的产品组成如下：

组成	规格	储存条件
CB0062V-A	粉剂×1瓶	4℃保存。临用前各加100mL蒸馏水，充分溶解。
CB0062V-B	液体×1瓶	4℃保存。
CB0062V-C	粉剂×1瓶	4℃保存。
工作液配制：	临用前配制，戴一次性手套，小心打开CB0062V-C瓶盖，加CB0062V-B 20mL充分溶解，4℃避光可保存1周。

注：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

操作说明

一、自备用品：
可见分光光度计、1mL玻璃比色皿和蒸馏水、普通离心机，超速离心机、可调式移液枪。

二、样品中细胞色素b5提取：
1.除去细胞核和线粒体等大分子物质：称约0.5g组织，加入1 mL 4℃预冷的CB0062V-A，冰上充分研磨，10 000g 4℃离心30min，取上清液转入超速离心管。
2.粗制微粒体：4℃，100 000g，离心60min，弃上清液。
3.除血红蛋白等杂质：向步骤2的沉淀中加1mL CB0062V-A，盖紧后充分震荡溶解，100000g离心30min，弃上清液。
4.最终微粒体：向步骤3的沉淀中加0.5mL CB0062V-B，盖紧后充分震荡溶解，即待测液，该待测液需当天测定。

三、测定步骤：
1.分光光度计/酶标仪预热30 min。
2.工作液置于25℃水浴中预热30 min。
3.取微量玻璃比色皿/96孔板依次加入下列试剂：

试剂名称	空白管 (μL)	测定管 (μL)
蒸馏水	50
待测液		50
工作液	1000	1000
室温静置2 min，测量424nm和490nm处吸光值，424nm处吸光值记为A 空白管1、A 测定管1；490nm处吸光值记为A 空白管2、A 测定管2。△A 空白管= A 空白管1- A 空白管2。△A 测定管= A 测定管1- A 测定管2。

注：只需要做一个空白管。

四、CYB5活性计算公式：
1.按蛋白浓度计算

CYB5含量 (nmol/mg prot) = (△A 测定管-△A 空白管)÷(ε×d)×V 反总÷(Cpr×V 样)
= 123×(△A 测定管-△A 空白管)÷Cpr
2.按样本鲜重计算

CYB5含量 (nmol/g 鲜重) = (△A 测定管-△A 空白管)÷(ε×d)×V 反总×(V 样总÷V 样)÷W
= 61.4×(△A 测定管-△A 空白管)÷W
注：ε：还原型细胞色素b5纳摩尔消光系数，171×10^-6 L/nmol/cm；d：比色皿光径（cm），1cm；V 反总：反应体系总体积，1.05mL=0.00105L；Cpr：待测液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定；V 样：加入反应体系中待测液体积，50μL=0.05mL；V 样总：待测液总体积，0.5 mL；W：样品质量，g。