Creatintine (Cr) Content Assay Kit (Spectrophotometry)

Name: Creatintine (Cr) Content Assay Kit (Spectrophotometry)
Brand: TargetMol
SKU: CB0057S
Rating: 5 (4 reviews)

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产品编号 CB0057S

别名 肌酐含量检测试剂盒（肌氨酸氧化酶法）（分光光度法）

规格	价格	库存	数量
50 T	¥ 2,808	10-12日内发货

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实验操作小课堂

常见问题解答

检测原理

肌酐在肌酸酶的催化下肌酸水解生成肌氨酸和尿素，肌氨酸在肌氨酸氧化酶的催化下氧化产生过氧化氢。过氧化物酶催化过氧化氢氧化 4-氨基安替比林偶联酚，生成有色化合物，在 505nm 有特征吸收峰。

产品组成

50T/48S规格的产品组成如下：

组成	规格	储存条件
CB0057S-ES1	60mL×1瓶	4℃保存。
CB0057S-ES2	8mL×1瓶	4℃保存。
CB0057S-A	粉剂×2支	-20℃保存；临用前加 1.7mL 蒸馏水溶解；用不完的分装后-20℃保存两周，禁止反复冻融。
CB0057S-B	粉剂×2支	-20℃保存；临用前加入 1.65mL 蒸馏水溶解；用不完的分装后-20℃保存两周，禁止反复冻融。
CB0057S-C	粉剂×2支	-20℃保存；临用前取一支加入 1mL 蒸馏水溶解；用不完的分装后-20℃保存两周，禁止反复冻融；使用前根据实验所需用量，按照试剂C：蒸馏水=1:9 的比例，充分混匀，现配现用。
CB0057S-D	粉剂×1支	4℃保存；临用前取一支加入 1mL 蒸馏水溶解；用不完的分装后-20℃保存两个月，禁止反复冻融。
CB0057S-E	粉剂×2瓶	-20℃保存；临用前加入 3.4mL 蒸馏水溶解；用不完的分装后-20℃保存两周，禁止反复冻融。
CB0057S-F-1	10mL×1瓶	4℃保存；临用前根据实验所需用量，按照试剂F-1液：试剂F-2液=1:1的比例，充分混匀，现用现配。
CB0057S-F-2	10mL×1瓶	4℃保存；临用前根据实验所需用量，按照试剂F-1液：试剂F-2液=1:1的比例，充分混匀，现用现配。
CB0057S-Standard	粉剂×1支	4℃保存；临用前加入 1mL 蒸馏水，充分溶解，即 1mg/mL 标准储备液，4℃保存 1个月。临用前取 50μL 和 200μL 蒸馏水混合配制成200μg/mL 的标准溶液备用，现用现配。

注：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

操作说明

一、自备用品：
天平、低温离心机、恒温水浴锅、分光光度计、1cm玻璃比色皿、恒温水浴锅、研钵/匀浆器、蒸馏水。

二、粗酶液提取：

组织样本：按照质量（g）：CB0057S-ES1体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1 g 组织，加入 1mL CB0057S-ES1）加入CB0057S-ES1，冰浴匀浆后于 4℃，12000 g 离心 10 min，取 0.8 mL 上清液，再加入 0.15 mL CB0057S-ES2，混匀，4℃，12000 g 离心 10 min 后取上清待测。
血清样本：取 100 μL 血清（浆）加入 1 mL CB0057S-ES1，4℃，12000 g 离心 10 min，取 0.8 mL 上清液，再加入 0.15 mL CB0057S-ES2，4℃，混匀，12000 g 离心 10 min 后取上清待测。
细胞样本：按照细胞数量（10⁴个）：CB0057S-ES1体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1 mL CB0057S-ES1），冰浴超声波破碎细胞（功率 300W，超声 3 秒，间隔 9 秒，总时间 5 min）；于 4℃，12000 g 离心 10 min，取 0.8 mL 上清液，再加入 0.15 mL CB0057S-ES2，混匀，4℃，12000 g 离心 10 min 后取上清待测。

三、测定步骤：

分光光度计/酶标仪预热30 min，调节波长到505 nm，蒸馏水调零。
操作表：按下表加入下列试剂：

试剂名称	测定管 (μL)	空白管 (μL)	标准管 (μL)
样本	60
蒸馏水		60
标准液			60
CB0057S-A	60	60	60
CB0057S-B	60	60	60
CB0057S-C工作液	15	15	15
CB0057S-D	15	15	15
充分混匀，37℃（哺乳动物）或 25℃（其他物种）条件下，反应 10 min。
CB0057S-E	120	120	120
CB0057S-F	270	270	270
充分混匀，37℃（哺乳动物）或 25℃（其他物种）条件下，显色 30 min。

充分混匀，测定 505 nm 处的吸光度；分别记为A 测定、A 空白、A 标准。ΔA测=A 测定-A 空白，ΔA标=A 标准-A 空白（空白管只需做1-2次）。

四、活性计算公式：

按蛋白浓度计算：

肌酐含量（μg/mg prot）= C 标×ΔA 测÷ΔA 标×V 样÷（V 样×Cpr）=200×ΔA 测÷ΔA 标÷Cpr
2. 按样本鲜重计算：

肌酐含量（μg/g 质量）= C 标×ΔA 测÷ΔA 标×（V 上清+V CB0057S-ES2）÷（W×V 上清÷V CB0057S-ES1）
= 237.5×ΔA 测÷ΔA 标÷W
3. 按照细菌或细胞数量计算：

肌酐含量（μg/10⁴ cell）= C 标×ΔA 测÷ΔA 标×（V 上清+V CB0057S-ES2）÷（细胞数量×V 上清÷V CB0057S-ES1）
= 237.5×ΔA 测÷ΔA 标÷细胞数量
4. 按照血清（浆）体积计算：

肌酐含量（μg/mL）= C 标×ΔA 测÷ΔA 标×(V 上清+V CB0057S-ES2)÷ [V 液体×V 上清÷(V CB0057S-ES1+V 液体)]
= 2612.5×ΔA 测÷ΔA标
注：C标：标准管浓度，200 μg/mL；V 样：加入样本体积，60 μL=0.06 mL；V 上清：提取时上清液体积，0.8 mL；V CB0057S-ES1：加入CB0057S-ES1体积，1 mL；V CB0057S-ES2：加入CB0057S-ES2，0.15 mL；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；细胞数量：以 10⁴计；V 液体：液体样本体积，0.1 mL。

注意事项

提取液中含有蛋白沉淀剂，提取的上清液不能用于蛋白浓度的测定。若想要用蛋白浓度计算肌酐含量需要另取样本，即取相同质量的组织、同等数目的细菌或细胞，用 1.1875mL PBS（生理盐水）匀浆；取相同体积的血清（浆），用 206mL PBS（生理盐水）匀浆（相当于提取步骤最终样本上清液），用BCA法进行蛋白浓度测定。
如果测定吸光值超过标准管吸光值，建议用蒸馏水稀释样本后再进行测定。如果 ΔA 测定小于 0.01，建议增大样本量后再进行测定。样本蛋白质含量需要另外测定。
蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。