Creatintine (Cr) Content Assay Kit (Microanalysis)

肌酐在肌酸酶的催化下肌酸水解生成肌氨酸和尿素，肌氨酸在肌氨酸氧化酶的催化下氧化产生过氧化氢。过氧化物酶催化过氧化氢氧化4-氨基安替比林偶联酚，生成有色化合物，在 505nm 有特征吸收峰。

100T/96S规格的产品组成如下：

注：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
天平、低温离心机、恒温水浴锅、分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、恒温水浴锅、研钵/ 匀浆器、蒸馏水。

二、粗酶液提取：

1. 组织样本：按照质量（g）：CB0057M-ES1体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1 g 组织，加入 1mL CB0057M-ES1）加入CB0057M-ES1，冰浴匀浆后于 4℃，12000 g 离心 10 min，取 0.8 mL 上清液，再加入 0.15 mL CB0057M-ES2， 混匀，4℃，12000 g 离心 10 min 后取上清待测。
2. 血清样本：取 100 μL 血清（浆）加入 1 mL CB0057M-ES1，4℃，12000 g 离心 10 min，取 0.8 mL 上清液，再加入 0.15 mL CB0057M-ES2，4℃，混匀，12000 g 离心 10 min 后取上清待测。
3. 细胞样本：按照细胞数量（10⁴个）：CB0057M-ES1体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1 mL CB0057M-ES1），冰浴超声波破碎细胞（功率 300W，超声 3 秒，间隔 9 秒，总时间 5 min）；于 4℃，12000 g 离心 10 min，取 0.8 mL 上清液，再加入 0.15 mL CB0057M-ES2，混匀，4℃，12000 g 离心 10 min 后取上清待测。
   三、测定步骤：
4. 分光光度计/酶标仪预热30 min，调节波长到505nm，蒸馏水调零。
5. 操作表：按下表加入下列试剂：

四、活性计算公式：

1. 按蛋白浓度计算：

肌酐含量（μg/mg prot）= C 标×ΔA 测÷ΔA 标×V 样÷（V 样×Cpr）=200×ΔA 测÷ΔA 标÷Cpr
2. 按样本鲜重计算：

肌酐含量（μg/g 质量）= C 标×ΔA 测÷ΔA 标×（V 上清+V CB0057M-ES2）÷（W×V 上清÷V CB0057M-ES1）
= 237.5×ΔA 测÷ΔA 标÷W
3. 按照细菌或细胞数量计算：

肌酐含量（μg/10⁴ cell）= C 标×ΔA 测÷ΔA 标×（V 上清+V CB0057M-ES2）÷（细胞数量×V 上清÷V CB0057M-ES1）
= 237.5×ΔA 测÷ΔA 标÷细胞数量
4. 按照血清（浆）体积计算：

肌酐含量（μg/mL）= C 标×ΔA 测÷ΔA 标×(V 上清+V CB0057M-ES2)÷ [V 液体×V 上清÷(V CB0057M-ES1+V 液体)]
= 2612.5×ΔA 测÷ΔA 标
注：C 标：标准管浓度，200μg/mL；V 样：加入样本体积，20μL=0.02 mL；V 上清：提取时上清液体积，0.8mL；V CB0057M-ES1：加入CB0057M-ES1体积，1mL；V CB0057M-ES2：加入CB0057M-ES2，0.15mL；W：样本质量，g；Cpr： 样本蛋白浓度，mg/mL；细胞数量：以 10⁴计；V 液体：液体样本体积，0.1mL。

1. 提取液中含有蛋白沉淀剂，提取的上清液不能用于蛋白浓度的测定。若想要用蛋白浓度计算肌酐含量需要另取样本，即取相同质量的组织、同等数目的细菌或细胞，用 1.1875mL PBS（生理盐水）匀浆；取相同体积的血清（浆），用 206mL PBS（生理盐水）匀浆（相当于提取步骤最终样本上清液），用BCA法进行蛋白浓度测定。
2. 如果测定吸光值超过标准管吸光值，建议用蒸馏水稀释样本后再进行测定。如果 ΔA 测定小于 0.01，建议增大样本量后再进行测定。样本蛋白质含量需要另外测定。
3. 蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
4. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。