Chymotrypsin Assay Kit (UV Spectrophotometry)

糜蛋白酶催化 ATEE 水解，产物在 237 nm 有特征光吸收；通过测定 237 nm光吸收增加速率，来计算糜蛋白酶活性。

50T/48S规格的产品组成如下：

注：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
紫外分光光度计、1mL 石英比色皿、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
二、粗酶液提取：
组织样品：按照组织质量（g）：CB0052UV-A体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0052UV-A）冰浴匀浆，8000g，4℃离心 10min，取上清，即粗酶液。
三、测定步骤：

1. 分光光度计预热 30min，调节波长到 237 nm，蒸馏水调零。
2. CB0052UV-B置于 37℃水浴中保温 30min。
3. 取1mL 石英比色皿加入下列试剂：

注：空白管只需测定1-2次。

四、糜蛋白酶活性计算公式：
按蛋白浓度计算
活性单位定义：25℃每毫克蛋白每分钟催化吸光值增加1为一个酶活单位。
糜蛋白酶 (U/mg prot) = (△A 测定管-△A 空白管)×V 反总÷(Cpr×V1)÷T = 2.75×(△A 测定管-△A 空白管)÷Cpr
注：Cpr：粗酶液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定；V1：加入反应体系中粗酶液体积（mL）， 100μL=0.1 mL；V 反总：反应总体积，1100μL=1.1mL；T：反应时间（min），4min。
按样本质量计算
活性单位定义：25℃每克样品每分钟催化吸光值增加1为一个酶活单位。
糜蛋白酶 (U/g) = (△A 测定管-△A 空白管)×V 反总÷(W×V1÷V2)÷T = 2.75×(△A 测定管-△A 空白管)÷W
注： W：样品质量（g）；V1：加入反应体系中粗酶液体积（mL），100μL=0.1 mL；V2：粗酶液总体积（mL），1 mL；V 反总：反应总体积，1100μL=1.1mL；T：反应时间（min），4min。

1. 测定过程操作须迅速。
2. CB0052UV-B试剂配制好后 3 天内使用完。
3. 蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
4. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。