Chymotrypsin Assay Kit (Microanalysis)

糜蛋白酶催化 ATEE 水解，产物在 237 nm 有特征光吸收；通过测定 237 nm 光吸收增加速 率，来计算糜蛋白酶活性。

100T/96S规格的产品组成如下：

一、自备用品：
紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、水浴锅、天平、烘箱、玻璃管、离心机、可调式移液枪、蒸馏水。

二、粗酶液提取：
1.组织样品：按照组织质量（g）：CB0052M-A体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织， 加入 1mL CB0052M-A）冰浴匀浆，8000g，4℃离心 10min，取上清，即粗酶液。
2.血清等液体：直接测定。

三、测定步骤：
1.分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长到 237 nm，蒸馏水调零。
2.CB0052M-B置于 37℃水浴中保温 30min。
3.取微量玻璃比色皿或 96 孔板加入下列试剂：

四、糜蛋白酶活性计算公式：
1.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
（1）按蛋白浓度计算
活性单位定义：25℃每毫克蛋白每分钟催化吸光值增加 1 为一个酶活单位。
糜蛋白酶 (U/mg prot) = (△A 测定管-△A 空白管) ×V 反总÷(Cpr×V1)÷T = 2.75×(△A 测定管-△A 空白管)÷Cpr
（2）按样本质量计算
活性单位定义：25℃每克样品每分钟催化吸光值增加 1 为一个酶活单位。
糜蛋白酶 (U/g) = (△A 测定管-△A 空白管) ×V 反总÷(W×V1÷V2)÷T = 2.75×(△A 测定管-△A 空白管)÷W
注：W：样品质量（g）；Cpr：粗酶液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定；V1：加入反应体 系中粗酶液体积（mL），20μL=2×10-2 mL；V2：粗酶液总体积（mL），1 mL；V 反总：反 应总体积，220μL=0.22mL； T：反应时间（min），4min。
2.使用 96 孔板测定的计算公式如下
（1）按蛋白浓度计算
活性单位定义：25℃每毫克蛋白每分钟催化吸光值增加 1 为一个酶活单位。
糜蛋白酶 (U/mg prot) = (△A 测定管-△A 空白管) ×V 反总÷(Cpr×V1)÷T = 2.75×(△A 测定管-△A 空白管)÷Cpr
（2）按样本质量计算
活性单位定义：25℃每克样品每分钟催化吸光值增加 1 为一个酶活单位。
糜蛋白酶 (U/g) = (△A 测定管-△A 空白管) ×V 反总÷(W×V1÷V2)÷T = 2.75×(△A 测定管-△A 空白管)÷W
注：W：样品质量（g）；Cpr：粗酶液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定；V1：加入反应体 系中粗酶液体积（mL），20μL=2×10-2 mL；V2：粗酶液总体积（mL），1 mL；V 反总：反 应总体积，220μL=0.22mL； T：反应时间（min），4min。

1.测定前须先取 1-2 个样做预实验，使得吸光值在 5min 内程线性变化。测定过程操作须迅速。
2.CB0052M-B试剂配制好后 3 天内使用完。
3.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
4.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• CB0052M-糜蛋白酶活性检测试剂盒（微量法）-中文(232 KB)