Cellulose Assay Kit (Visible Spectrophotometry)

纤维素为β－葡萄糖残基组成的多糖，在酸性条件下加热能分解成β－葡萄糖，β－葡萄糖在强酸作用下，可脱水生成β－糠醛类化合物，再与蒽酮脱水缩合，生成糠醛衍生物，颜色的深浅可间接定量测定纤维素含量。

50T/48S规格的产品组成如下：

注：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、80％乙醇、丙酮、浓硫酸（不允许快递）、研钵和蒸馏水等。
二、样本处理：

1. 细胞壁的提取：取约0.3g（标记为W1）样本，加入1mL 80％乙醇，室温快速匀浆，90℃水浴20min（加热过程中EP管可能爆开，建议用胶带封口或使用防爆EP管），冷却至室温，6000g 25℃离心10min，弃上清。沉淀加入1.5mL 80％乙醇和丙酮各洗一遍（涡旋振荡2min左右，6000g 25℃离心10min，弃上清即可），沉淀即为粗细胞壁，加入1mL CB0046V-A（去除淀粉）浸泡15小时，6000g 25℃离心10min，弃上清，将沉淀用蒸馏水清洗两遍（涡旋振荡2min左右，6000g 25℃离心10min，弃上清即可），然后将沉淀干燥（60-100℃），称重得细胞壁物质（CWM），标记为W2。
2. 纤维素的提取：称取烘干的CWM约 5mg（标记为W3），加入0.5mL蒸馏水充分匀浆（若烘干物质质地坚硬，可先研碎后再加入0.5mL蒸馏水匀浆，或者用匀浆器匀浆），匀浆液转移至EP管中，用蒸馏水定容至0.5mL，置于冰水浴中，缓慢加入0.75mL浓硫酸，混匀，冰水浴中静置30min。8000g 4℃离心10min，取上清液，用蒸馏水稀释20倍后待测。

三、测定步骤：

1. 分光光度计预热30min以上，调节波长至620nm，蒸馏水调零。
2. 调节水浴锅至95度。
3. 将CB0046V-标准品临用前加入 1mL 蒸馏水溶解，配成 10 mg/mL标准溶液备用（4℃保存两周），再将10mg/mL标准液用蒸馏水稀释为0.1、0.075、0.05、0.025、0.0125、0.00625 mg/mL的标准溶液备用。
4. 工作液的配制：在CB0046V-B中加入3mL CB0046V-C，充分溶解，如较难溶解，可加热搅拌；用不完的试剂4℃保存一周；
5. 样本测定（在EP管中反应）：

注：空白管和标准曲线只需做1-2次。

四、纤维素含量计算：
标准曲线的绘制：

根据标准管的浓度（x，mg/mL）和吸光度ΔA 标准（y，ΔA 标准），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA（y， ΔA）带入公式计算样本浓度（x，mg/mL）。
纤维素含量的计算：

（1）按样本质量计算
纤维素（mg/g 质量）=x×V 提取×20×（W2÷W3）÷W1÷1.11=22.52×x×W2÷W3÷W1
（2）按样本细胞壁物质（CWM）质量计算
纤维素（mg/g干重）=x×V 提取×20÷W3÷1.11=22.52x÷W3
1.11：是此法测得葡萄糖含量换算为纤维素含量的常数，即111 µg葡萄糖用蒽酮试剂显色相当于100µg纤维素蒽酮试剂所显示的颜色；V 提取：纤维素提取液体积，1.25mL（0.5mL蒸馏水+0.75mL浓硫酸）；20：样本稀释倍数；W1：样本质量，0.3g；W2：样本细胞壁物质（CWM）质量，g；W3，提取纤维素时称取的细胞壁物质（CWM）质量，g。

1. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。