Cellulase Assay Kit (Visible Spectrophotometry)

采用3.5－二硝基水杨酸法测定CL催化纤维素降解产生的还原糖的含量。

50T/24S规格的产品组成如下：

注：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
二、样品测定的前处理：

1. 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：CB0045V-ES体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL CB0045V-ES），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g ，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2. 组织：按照组织质量（g）：CB0045V-ES体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0045V-ES），进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

三、测定步骤：

1. 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 550nm，蒸馏水调零。
2. 标准品的准备：临用前加入 1mL 蒸馏水溶解，配制成 10mg/mL标准液备用（4℃可保存1周），再将标准品用蒸馏水稀释至5、4、3、2、1、0.5、0 mg/mL。
3. 在 EP 管中依次加入下列试剂：

注：每个测定管需设一个对照管。
四、CL活力计算：

标准曲线的建立：以浓度（y）为纵坐标，吸光度 A（x，减去浓度为 0 标准管的 OD 值）为横坐标建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA 带入公式中（x）计算浓度 y（mg/mL）。
按照蛋白浓度计算

单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
CL 活力（U/mg prot）＝1000×y×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T=233×y÷Cpr
按样本鲜重计算

单位的定义：每 g 组织每分钟催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
CL 活力（U/g 质量）＝1000×y×V 反总÷（W×V 样÷V 样总）÷T =233×y÷W
按细菌或细胞密度计算

单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
CL 活力（U/10⁴ cell）＝1000×y×V 反总÷（500×V 样÷V 样总）÷T =0.467×y
注： 1000：1mg/mL=1000ug/mL；V 反总：反应体系总体积，0.35mL；V 样：加入样本体积，0.05 mL；V 样总：加入CB0045V-ES体积，1 mL；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

1. 蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。