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Catalase Assay Kit (UV Spectrophotometry)

Catalase Assay Kit (UV Spectrophotometry)

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Catalase Assay Kit (UV Spectrophotometry)
产品编号 CB0044UV
别名 过氧化氢酶(CAT)活性检测试剂盒(紫外分光光度法)
规格价格库存数量
50 T
¥ 143
4-6日内发货
大包装 & 定制
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TargetMol 的所有产品仅用作科学研究或药证申报,不能被用于人体,我们不向个人提供产品和服务。请您遵守承诺用途,不得违反法律法规规定用于任何其他用途。
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Handling Instruction | TargetMol 检测原理

H2O2 在 240nm 下有特征吸收峰,CAT 能够分解 H2O2,使反应溶液 240nm 下的吸光度随反应时间而下降,根据吸光度的变化率可计算出 CAT 活性。

Handling Instruction | TargetMol 产品组成

50T/48S规格的产品组成如下:

组成 规格 储存条件
CB0044UV-ES 60mL×1 瓶 4℃保存。
CB0044UV-A 60mL×1 瓶 4℃保存。
CB0044UV-B 100μL×3 瓶 4℃保存。
CAT 检测工作液的配制:用时在每瓶CB0044UV-B中加入 20mL CB0044UV-A,充分混匀,作为工作液;用不完的试剂4℃保存一周。

注:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

Handling Instruction | TargetMol 操作说明

一、自备用品:
紫外分光光度计、1mL石英比色皿、台式离心机、水浴锅、可调式移液枪、研钵、冰和双蒸水。
二、粗酶液提取:

  1. 细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):CB0044UV-ES(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL CB0044UV-ES,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);然后8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
  2. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
  3. 血清(浆)样品:直接检测。

三、测定步骤:

  1. 紫外分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 240nm,蒸馏水调零。
  2. 试剂准备见产品组成及储存条件列表。
  3. 测定前将 CAT 检测工作液 37℃(哺乳动物)或 25℃(其他物种)水浴 10min。
  4. 取 1mL CAT 检测工作液于 1mL 石英比色皿中,再加入 35μL 样本,混匀 5s;室温下立即测定 240nm下的初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2。计算ΔA=A1-A2。

四、CAT 活性计算:

  1. 血清(浆)CAT 活力的计算:

单位的定义:每毫升血清(浆)在反应体系中每分钟催化 1nmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。
计算公式:CAT (U/mL) = [ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样÷T = 678×ΔA
2. 组织、细菌或细胞中 CAT 活力计算:

(1) 按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化 1nmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。
计算公式:CAT (U/ mg prot) = [ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr)÷T = 678×ΔA÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算:
单位的定义:每 g 组织在反应体系中每分钟催化 1nmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。
计算公式:CAT (U/g 鲜重) = [ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W×V 样÷V 样总)÷T = 678×ΔA÷W
3. 按细菌或细胞中 CAT 活力计算:

单位的定义:每 1 万个细菌或细胞在每分钟反应体系中每分钟催化 1nmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。
计算公式:CAT (U/104 cell) = [ΔA×V 反总÷(ε×d) ×109]÷(500×V 样÷V 样总)÷T = 1.356×ΔA
注: V 反总:反应体系总体积,1.035×10-3L;ε: H2O2 摩尔吸光系数,4.36×104L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.035mL;V 样总:加入CB0044UV-ES体积,1mL;T:反应时间,1min;W,样本质量(g);Cpr:上清液蛋白浓度,mg/mL;500:细胞或细菌总数,500 万; 109:单位换算系数,1 mol=109nmol。

Handling Instruction | TargetMol 注意事项

  1. 蛋白定量测定,建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
  2. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
  3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。