Catalase Assay Kit (Microanalysis)

H₂O₂ 在 240nm 下有特征吸收峰，CAT 能够分解 H₂O₂，使反应溶液 240nm 下的吸光度随反应时间而下降，根据吸光度的变化率可计算出 CAT 活性。

100T/96S规格的产品组成如下：

注：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板（UV板）、水浴锅、可调式移液枪、研钵、冰和双蒸水。
二、粗酶液提取：

1. 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：CB0044M-ES（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL CB0044M-ES，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；然后8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2. 组织：按照组织质量（g）：CB0044M-ES体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0044M-ES），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3. 血清（浆）样品：直接检测。

三、测定步骤：

1. 紫外分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 240nm，蒸馏水调零。
2. CAT 检测工作液的配制：见产品组成及储存条件列表。
3. 测定前将 CAT 检测工作液 37℃（哺乳动物）或 25℃（其他物种）水浴 10min。
4. 在微量石英比色皿或 96 孔板（UV板）中加入 10μL 样本和 190μL 工作液，立即混匀并计时，记录 240nm下初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2。计算ΔA＝A1-A2。

四、CAT 活性计算：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下：

1. 血清（浆）CAT 活力的计算：

单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟催化 1nmol H₂O₂降解定义为一个酶活力单位。
计算公式：CAT (U/mL) = [ΔA×V 反总÷(ε×d)×10⁹]÷V 样÷T = 459×ΔA
2. 组织、细菌或细胞中 CAT 活力计算：

（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化 1nmol H₂O₂降解定义为一个酶活力单位。
计算公式：CAT (U/mg prot) = [ΔA×V 反总÷(ε×d)×10⁹]÷(Cpr×V 样) ÷T = 459×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g 组织每分钟催化 1nmol H₂O₂降解定义为一个酶活力单位。
计算公式：CAT (U/g 鲜重) = [ΔA×V 反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V 样÷V 样总×W)÷T = 459×ΔA÷W
（3） 按细菌或细胞数量计算：
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟催化 1nmol H₂O₂ 降解定义为一个酶活力单位。
计算公式：CAT(U/10⁴ cell) = [ΔA×V 反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V 样÷V 样总×500)÷T = 0.917×ΔA
注： V 反总：反应体系总体积，2×10^-4 L；ε：H₂O₂ 摩尔消光系数，4.36×10⁴L/ mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.01 mL；V 样总：加入CB0044M-ES体积，1 mL；T：反应时间，1 min；W：样本鲜重，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；500：细胞或细菌总数，500 万；10⁹：单位换算系数，1 mol=10⁹nmol。
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下：

1. 血清（浆）CAT 活力的计算：

单位的定义：每毫升血清（浆）在反应体系中每分钟催化 1nmol H₂O₂降解定义为一个酶活力单位。
计算公式：CAT (U/mL) = [ΔA×V 反总÷(ε×d)×10⁹]÷V 样÷T = 918×ΔA
2. 组织、细菌或细胞中 CAT 活力计算：

（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化 1nmol H₂O₂降解定义为一个酶活力单位。
计算公式：CAT (U/mg prot) = [ΔA×V 反总÷(ε×d)×10⁹]÷(Cpr×V 样) ÷T = 918×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g 组织在反应体系中每分钟催化 1nmol H₂O₂降解定义为一个酶活力单位。
计算公式：CAT (U/g 鲜重) = [ΔA×V 反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V 样÷V 样总×W)÷T= 918×ΔA÷W
（3） 按细菌或细胞数量计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟催化 1nmol H₂O₂降解定义为一个酶活力单位。
计算公式：CAT (U/10⁴ cell) = [ΔA×V 反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V 样÷V 样总×500)÷T = 1.834×ΔA
注： V 反总：反应体系总体积，2×10^-4 L；ε：H₂O₂摩尔消光系数，4.36×10⁴ L / mol/ cm；d：96 孔板光径，0.5cm；V 样：加入样本体积，0.01 mL；V 样总：加入CB0044M-ES体积，1 mL；T：反应时间，1 min；W：样本鲜重，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；500：细胞或细菌总数，500 万；10⁹：单位换算系数，1 mol=10⁹nmol。

1. 蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。