Carboxylesterase Assay Kit (Microanalysis)

CarE 能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯，固蓝显色；在 450 nm 光吸收增加速率，计算 CarE 活性。

100T/96S规格的产品组成如下：

注：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、低温离心机、水浴锅、研钵/匀浆器、可调式移液枪、无水乙醇和蒸馏水。
二、粗酶液提取：
细菌、细胞样品制备：

收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每 200 万细菌或细胞加入 400μL CB0043M-A，超声波破碎细菌或细胞（功率 20％，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；12000g 4℃离心 30min， 取上清液置冰上待测。
组织样品制备：

按照组织质量（g）：CB0043M-A体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0043M-A）进行冰浴匀浆；12000g 4℃离心 30min，取上清液置冰上待测。
液体：直接测定。

三、测定步骤

1. 分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长到 450 nm，分光光度计蒸馏水调零。
2. 试剂配制：
   （1）.临用前取1支CB0043M-C，加0.6mL无水乙醇充分溶解。
   （2）.临用前取1支CB0043M-D，加少量CB0043M-B溶解。

（3）.工作液配制：临用前配制，向1瓶CB0043M-B中，加入溶解后的CB0043M-C和CB0043M-D各1支，充分溶解，过滤，4℃避光保存，可用1周。
3. 工作液在使用前 37℃预热30min。
4. 在微量玻璃比色皿/96孔板中依次加入：

注：空白管只需要测定1-2次。
四、CarE活性计算公式：

1. 组织中 CarE 活性

（1）按蛋白浓度计算
活性单位定义：每mg组织蛋白在 37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为1个酶活单位。
CarE 酶活 (U/mg prot) = (△A 测定管-△A 空白管) ×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T
= 13.67×(△A 测定管-△A 空白管)÷Cpr
注：Cpr：蛋白质浓度，mg/mL；V 样：加入上清液体积，0.005 mL；T：反应时间，3min，V 反总：205μL=0.205mL；蛋白质浓度需要另外测定，建议使用TargetMol的BCA蛋白质含量测定试剂盒(C0050)。
（2）按样本鲜重计算
活性单位定义：每g组织在 37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为1个酶活单位。
CarE 酶活 (U/g 鲜重) = (△A 测定管-△A 空白管) ×V 反总×(V 样总÷V 样)÷W÷T
= 13.67×(△A 测定管-△ A 空白管)÷W
注：V 样总：上清液总体积，1mL；V 样：加入上清液体积(mL)，0.005 mL；V 反总：205μL=0.205mL；W：样品质量（g）；T：反应时间（min），3min。
2. 细菌或细胞中 CarE 活性

活性单位定义：每1万个细菌或细胞在 37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为一个 CarE 活性单位。
CarE酶活(U/10⁴cell) = (△A 测定管-△A 空白管) ×V 反总×(V 样总÷V 样)÷细胞密度(10⁴ cell/mL)÷T
=5.47×(△A 测定管-△A 空白管)÷细胞密度(10⁴ cell/mL)
注：V 样总：上清液总体积，0.4 mL；V 样：加入上清液体积(mL)，0.005 mL；V 反总：205μL=0.205mL；T：反应时间（min），3min。
3. 液体中 CarE 活性

活性单位定义：每毫升样品在 37℃反应体系中每分钟催化吸光值增加1定义为1个酶活单位。
CarE 酶活 (U/mL ) = (△A 测定管-△A 空白管) ×V 反总÷V 样÷T
= 13.67×(△A 测定管-△A 空白管)
注：V 样：加入上清液体积(mL)，0.005 mL；V 反总：205μL=0.205mL；T：反应时间（min），3min。

1. 蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。