Name: B-AI Assay Kit (Spectrophotometry)
Brand: TargetMol
SKU: CB0033S
Rating: 5 (4 reviews)

规格

价格

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数量

50 T

¥ 748

10-12日内发货

产品组成

50T/24S规格的产品组成如下：

组成	规格	储存条件
CB0033S-ES-1	50mL×1瓶	4℃保存。
CB0033S-ES-2	50mL×1瓶	4℃保存。
CB0033S-A	50mL×1瓶	4℃保存。
CB0033S-B	粉剂×1 瓶	4℃保存；临用前加入25mL试CB0033S-A充分溶解备用；剩余试剂4℃保存。
CB0033S-C	30mL×1瓶	4℃保存。
CB0033S-Standard	粉剂×1 支	用时加入 1 mL 蒸馏水充分溶解，制备 10 mg/mL 葡萄糖标准溶液待用；用不完的试剂 4℃保存一周。

注：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

操作说明

一、自备用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
二、粗酶液提取：
按照组织质量（g）：CB0033S-ES-1 体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL CB0033S-ES-1），进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心10min，弃上清，沉淀中加入1mL 蒸馏水，充分震荡混匀，12000g 4℃离心10min，弃上清，沉淀中加入1mL CB0033S-ES-2 充分混匀，4℃浸提过夜，12000g 4℃离心20min，取上清置冰上待测。
三、测定步骤：

分光光度计或酶标仪预热30min 以上，调节波长至520nm，蒸馏水调零。
标准品的制备：将标准品用蒸馏水稀释至2、1.5、1.2、1、0.8、0.5、0mg/mL（0mg/mL为空白管）。
样本测定（在EP 管中依次加入下列试剂）：

试剂名称	对照管 (μL)	测定管 (μL)	标准管 (μL)	空白管 (μL)
样本	200	200
标准溶液			200
蒸馏水	800			200
CB0033S-A	800	800	800	800
CB0033S-B		800	800	800
混匀，37℃准确水浴30min。			混匀，37℃准确水浴30min。
CB0033S-C	500	500	500	500
混匀，95℃水浴10min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀， 520nm处，蒸馏水调零，记录各管吸光值A，如果吸光值大于 2，可以用蒸馏水稀释后测定（计算公式中乘以相应稀释倍数），分别记为 A 对照管，A 测定管，A 标准管，A 空白管。计算 ΔA=A 测定管-A 对照管，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。每个测定管需设一个对照管（标准曲线只需检测 1-2 次）。每个测定管需要设一个对照管。

四、B-AI 活性计算：

标准曲线的建立：以各浓度下吸光值减空白管（浓度为0mg/mL）的吸光度为y轴，葡萄糖浓度为x轴绘制标准曲线。根据标准曲线，将ΔA带入方程得到x（mg/mL）。
B-AI活性计算：
（1）按照蛋白浓度计算

单位的定义：37℃每mg 蛋白每分钟产生1μg 还原糖定义为一个酶活性单位。
B-AI 活性 (μg/min /mg prot) = [1000×x×V1]÷(V1×Cpr)÷T = 33.33x÷Cpr
（2）按样本鲜重计算

单位的定义：37℃每 g 组织每分钟产生 1μg 还原糖定义为一个酶活性单位。
B-AI 活性 (μg/min /g 鲜重) = [1000×x×V1]÷(W×V1÷V2)÷T =33.33x÷W
注：1000：1mg/mL=1000μg/mL；V1：加入反应体系中样本体积，0.2mL；V2：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，30min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。

注意事项