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B-AI Assay Kit (Microanalysis)

B-AI Assay Kit (Microanalysis)

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B-AI Assay Kit (Microanalysis)
产品编号 CB0033M
别名 细胞壁不溶性酸性转化酶活性检测试剂盒(微量法)
规格价格库存数量
100 T
¥ 1,382
10-12日内发货
大包装 & 定制
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TargetMol 的所有产品仅用作科学研究或药证申报,不能被用于人体,我们不向个人提供产品和服务。请您遵守承诺用途,不得违反法律法规规定用于任何其他用途。
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Handling Instruction | TargetMol 检测原理

B-AI催化蔗糖降解产生还原糖,进一步与3,5-二硝基水杨酸反应,生成棕红色氨基化合物,在520nm有特征光吸收,在一定范围内520nm光吸收增加速率与B-AI活性成正比。

Handling Instruction | TargetMol 产品组成

100T/48S规格的产品组成如下:

组成 规格 储存条件
CB0033M-ES-1 100mL×1瓶 4℃保存。
CB0033M-ES-2 100mL×1瓶 4℃保存。
CB0033M-A 20mL×1瓶 4℃保存。
CB0033M-B 粉剂×1 瓶 4℃保存;临用前加入10mL试CB0033M-A充分溶解备用;剩余试剂4℃保存。
CB0033M-C 15mL×1瓶 4℃保存。
CB0033M-Standard 粉剂×1 支 用时加入 1 mL 蒸馏水充分溶解,制备 10 mg/mL 葡萄糖标准溶液待用;用不完的试剂 4℃保存一周。

注:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

Handling Instruction | TargetMol 操作说明

一、自备用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
二、粗酶液提取:
按照组织质量(g):CB0033M-ES-1 体积(mL)为1:5~10 的比例(建议称取约0.1g 组织,加入1mL CB0033M-ES-1),进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心10min,弃上清,沉淀中加入1mL 蒸馏水,充分震荡混匀,12000g 4℃离心10min,弃上清,沉淀中加入1mL CB0033M-ES-2 充分混匀,4℃浸提过夜,12000g 4℃离心20min,取上清置冰上待测。
三、测定步骤:

  1. 分光光度计或酶标仪预热30min 以上,调节波长至520nm,蒸馏水调零。
  2. 标准品的制备: 将标准品用蒸馏水稀释至2、1.5、1.2、1、0.8、0.5、0mg/mL(0mg/mL为空白管)。
  3. 样本测定(在EP 管中依次加入下列试剂):
试剂名称 对照管 (μL) 测定管 (μL) 标准管 (μL) 空白管 (μL)
样本 50 50
标准溶液 50
蒸馏水 200
CB0033M-A 200 200 200 200
CB0033M-B 200 200 200
混匀,37℃准确水浴30min。 混匀,37℃准确水浴30min。
CB0033M-C 125 125 125
混匀,95℃水浴10min(盖紧,以防止水分散失),流水冷却后充分混匀,取200μL 至微量石英比色皿或96 孔板中, 520nm 处记录各管吸光值A,如果吸光值大于 2,可以用蒸馏水稀释后测定(计算公式中乘以相应稀释倍数),分别记为 A 对照管,A 测定管,A 标准管,A 空白管。计算 ΔA=A 测定管-A 对照管,ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。每个测定管需设一个对照管(标准曲线只需检测 1-2 次)。每个测定管需要设一个对照管。

四、B-AI 活性计算:

  1. 标准曲线的建立: 以各浓度下吸光值减空白管(浓度为0mg/mL)的吸光度为y轴,葡萄糖浓度为x轴绘制标准曲线。根据标准曲线,将ΔA带入方程得到x(mg/mL)。
  2. B-AI活性计算:
    (1)按照蛋白浓度计算

单位的定义:37℃每mg 蛋白每分钟产生1μg 还原糖定义为一个酶活性单位。
B-AI 活性 (μg/min /mg prot) = [1000×x×V1]÷(V1×Cpr)÷T = 33.33x÷Cpr
(2)按样本鲜重计算

单位的定义:37℃每 g 组织每分钟产生 1μg 还原糖定义为一个酶活性单位。
B-AI 活性 (μg/min /g 鲜重) = [1000×x×V1]÷(W×V1÷V2)÷T =33.33x÷W
注:1000:1mg/mL=1000μg/mL;V1:加入反应体系中样本体积,0.05mL;V2:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,30min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。

Handling Instruction | TargetMol 注意事项

  1. 蛋白定量测定,建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
  2. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
  3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。