B-AI Assay Kit (Microanalysis)

B-AI催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在520nm有特征光吸收，在一定范围内520nm光吸收增加速率与B-AI活性成正比。

100T/48S规格的产品组成如下：

注：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
二、粗酶液提取：
按照组织质量（g）：CB0033M-ES-1 体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL CB0033M-ES-1），进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心10min，弃上清，沉淀中加入1mL 蒸馏水，充分震荡混匀，12000g 4℃离心10min，弃上清，沉淀中加入1mL CB0033M-ES-2 充分混匀，4℃浸提过夜，12000g 4℃离心20min，取上清置冰上待测。
三、测定步骤：

1. 分光光度计或酶标仪预热30min 以上，调节波长至520nm，蒸馏水调零。
2. 标准品的制备： 将标准品用蒸馏水稀释至2、1.5、1.2、1、0.8、0.5、0mg/mL（0mg/mL为空白管）。
3. 样本测定（在EP 管中依次加入下列试剂）：

四、B-AI 活性计算：

1. 标准曲线的建立： 以各浓度下吸光值减空白管（浓度为0mg/mL）的吸光度为y轴，葡萄糖浓度为x轴绘制标准曲线。根据标准曲线，将ΔA带入方程得到x（mg/mL）。
2. B-AI活性计算：
   （1）按照蛋白浓度计算

单位的定义：37℃每mg 蛋白每分钟产生1μg 还原糖定义为一个酶活性单位。
B-AI 活性 (μg/min /mg prot) = [1000×x×V1]÷(V1×Cpr)÷T = 33.33x÷Cpr
（2）按样本鲜重计算

单位的定义：37℃每 g 组织每分钟产生 1μg 还原糖定义为一个酶活性单位。
B-AI 活性 (μg/min /g 鲜重) = [1000×x×V1]÷(W×V1÷V2)÷T =33.33x÷W
注：1000：1mg/mL=1000μg/mL；V1：加入反应体系中样本体积，0.05mL；V2：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，30min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。

1. 蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。