Ascorbate Peroxidase Assay Kit (UV Spectrophotometry)

APX 催化H2O2 氧化 AsA，通过测定AsA 氧化速率，来计算得 APX 活性。

50T/48S规格的产品组成如下：

注：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

一、自备用品：
紫外分光光度计、1mL 石英比色皿、低温离心机、移液枪、研钵、冰和蒸馏水。
二、试剂预配制：
CB0028UV-B：临用前加入 5mL 蒸馏水充分溶解备用，4℃避光保存，并且 3 天内使用完。
三、粗酶液提取：
按照组织质量（g）：CB0028UV-A体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0028UV-A）冰浴匀浆，13000g，4℃离心 20min，取上清置冰上待测。
四、检测步骤：

1. 分光光度计预热 30min，调节波长到290 nm，蒸馏水调零。
2. CB0028UV-A置于 25℃水浴中保温30min。
3. 在 1mL 石英比色皿中按顺序加入下列试剂：

五、计算公式：
a.按照样本蛋白浓度计算

活性单位定义：每毫克蛋白每分钟氧化 1μmol AsA 为 1 个酶活单位。
APX (U/mg prot) = △A÷(ε×d) ×V 反总×10⁶÷(Cpr×V 样)÷T = 1.79×△A÷ Cpr
b.按照样本质量计算

活性单位定义：每 g 组织每分钟氧化 1μmol AsA 为 1 个酶活单位。
APX (U/g) = △A÷(ε×d)×V 反总×10⁶÷(W×V 样÷V 样总)÷T = 1.79×△A ÷W
注： ε：AsA 在 290nm 处摩尔吸光系数为 2.8×10³ L/mol/cm；d：比色皿光径（cm），1 cm；V 反总：反应体系总体积（L），1000μL=1×10^-3 L；10⁶：1mol=1×10⁶μmol；V 样：加入反应体系中上清液体积（mL），100μL=0.1 mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：上清液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定，建议使用TargetMol生产的BCA蛋白质含量测定试剂盒(C0050)；W：样本质量，g；T：催化反应时间（min），2min。

1. 蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。