Ascorbate Peroxidase Assay Kit (Microanalysis)

APX 催化H2O2 氧化 AsA，通过测定AsA 氧化速率，来计算得 APX 活性。

100T/96S规格的产品组成如下：

一、自备用品：
低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、移液枪、研钵、冰和蒸馏水。

二、试剂预配制：
CB0028M-B：临用前加入 3mL 蒸馏水充分溶解备用，4℃避光保存，并且 3 天内使用完。

三、粗酶液提取：
按照组织质量（g）：CB0028M-A体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0028M-A）冰浴匀浆，13000g，4℃离心 20min，取上清置冰上待测。

四、检测步骤：
1.紫外分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长到290 nm，蒸馏水调零。
2.CB0028M-A置于 25℃水浴中保温30min。
3.在 1mL 石英比色皿中按顺序加入下列试剂：

五、计算公式：
a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1.按照样本蛋白浓度计算

活性单位定义：每毫克蛋白每分钟氧化 1μmol AsA 为 1 个酶活单位。
APX (U/mg prot) = △A÷(ε×d)×V 反总×10⁶÷(Cpr×V 样)÷T = 1.79×△A÷ Cpr
2.按照样本质量计算

活性单位定义：每 g 组织每分钟氧化 1μmol AsA 为 1 个酶活单位。
APX (U/g ) = △A÷(ε×d)×V 反总×10⁶÷(W×V 样÷V 样总)÷T = 1.79×△A ÷W
注： ε：AsA 在 290nm 处摩尔吸光系数为 2.8×10³ L/mol/cm；d：比色皿光径（cm），1 cm；V 反总：反应体系总体积（L），200μL=2×10^-4 L；10⁶：1mol=1×10⁶μmol；Cpr：上清液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定，建议使用TargetMol生产的BCA蛋白质含量测定试剂盒(C0050)；W ：样品质量；V 样：加入反应体系中上清液体积（mL），20μL=0.02mL；V 样总：提取液体积，1 mL； T：催化反应时间（min），2min。
b. 使用96孔板测定的计算公式如下
1.按照样本蛋白浓度计算

活性单位定义：每毫克蛋白每分钟氧化 1μmol AsA 为 1 个酶活单位。
APX (U/mg prot) = △A÷(ε×d)×V 反总×10⁶÷(Cpr×V 样)÷T = 3.58×△A÷ Cpr
2.按照样本质量计算

活性单位定义：每 g 组织每分钟氧化 1μmol AsA 为 1 个酶活单位。
APX (U/g) = △A÷(ε×d)×V 反总×10⁶÷(W×V 样÷V 样总)÷T = 3.58×△A ÷W
注： ε：AsA 在 290nm 处摩尔吸光系数为 2.8×10³ L/mol/cm；d：比色皿光径（cm），0.5cm；V 反总：反应体系总体积（L），200μL=2×10^-4 L；10⁶：1mol=1×10⁶μmol；Cpr：上清液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定，建议使用TargetMol生产的BCA蛋白质含量测定试剂盒(C0050)；W：样品质量；V 样：加入反应体系中上清液体积（mL），20μL=0.02mL；V 样总：提取液体积，1 mL； T：催化反应时间（min），2min。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• CB0028M-抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性检测试剂盒（微量法）-中文 (228 KB)