Alkaline Xylanase Assay Kit (Microanalysis)

BAX 在碱性环境中催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖，在沸水浴条件下进一步与 3,5-二硝基水杨酸发生显色反应，在 540nm 处有特征吸收峰，反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比，通过测定反应液在 540nm 吸光值增加速率，可计算 BAX 活力。

100T/48S规格的产品组成如下：

1.自备用品：
天平、低温离心机、恒温水浴锅，可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。
2.粗酶液提取:
1)发酵液：发酵液于 8000g，4℃，离心 15min，取上清，作为待测样品。
2)酶干粉：称约 0.1mg，加缓冲液 1mL，震荡溶解待测。
3.检测步骤：
1)分光光度计预热 30min，调节波长到540nm，蒸馏水调零。
2)在EP管中按顺序加入下列试剂：

1)用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y = 2.8432x - 0.0293，R² = 0.9985
a.发酵液 BAX 活力计算：
酶活定义：50℃，pH9.0 条件下，每毫升发酵液每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。
BAX 活力 (nmol/min /mL) = 5x1000x(A540+0.0293)÷2.8432x150x30=391x(A540+0.0293)
注：150：木糖的分子量，30：反应时间，5：稀释倍数（300µL÷60µL=5），1000：转化因子，即 1mmol/L=1000μmol/L
b.酶干粉 BAX 活力计算：
酶活定义：50℃，pH9.0 条件下，每毫克酶每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。
BAX 活力 (nmol/min /mL) = 5x1000x(A540+0.0293)÷2.8432x150x30xW=391x(A540+0.0293)÷W
注：150：木糖的分子量，30：反应时间，5：稀释倍数 (300µL÷60µL=5)，1000：转化因子，即 1mmol/L=1000μmol/L；W：样品质量：mg。
2)用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y = 1.4216x - 0.0293，R² = 0.9985
a.发酵液BAX 活力计算
酶活定义：50℃，pH9.0 条件下，每毫升发酵液每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。
BAX 活力 (nmol/min /mL) = (A540+0.0293)÷1.4216÷150÷T×稀释倍数×1000 = 782×(A540+ 0.0293 )
b.酶干粉BAX 活力计算
酶活定义：50℃，pH9.0 条件下，每毫克酶每分钟分解木聚糖产生 1nmol 还原糖所需的酶量为一个碱性木聚糖酶的活力单位。
BAX 活力 (nmol/min /mg) = (A540+0.0293)÷1.4216÷150÷T×稀释倍数×1000 ÷W= 782×(A540+ 0.0293)÷W
注：150：木糖的分子量；T：反应时间，30min；稀释倍数=V反总÷V样=300µL÷60µL=5；1000：转化因子，即 1mmol/L=1000μmol/L ；W：样品质量：mg。

1.吸光度变化应该控制在 0.01-0.8 之间，否则加大样品量或稀释样品，注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变；也可以延长或者缩短反应时间。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

试剂盒 2-8℃保存，保质期 3 个月，建议尽快使用。

• CB0001M-碱性木聚糖酶(BAX)活性检测试剂盒说明书（微量法）-中文(1.4 MB)