Alkaline Phosphatase Assay Kit (Spectrophotometry)

在碱性环境中，AKP/ALP 催化磷酸苯二钠生成游离酚；酚与 4-氨基安替比林和铁氰化钾反应红色亚醌衍生物，在 510nm 有特征光吸收；通过测定 510 nm 吸光度增加速率，来计算AKP 活性。

50T/24S规格的产品组成如下：

一、自备用品：
紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、水浴锅、可调式移液枪、研钵、冰和双蒸水。
二、粗酶液提取：
1.组织：按照组织质量（g）：CB0019S-A体积(mL)为 1：5-10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0019S-A）进行冰浴匀浆。10000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2.血液可直接测定，或者适当稀释后测定。
三、测定步骤：
1.分光光度计预热 30 min，调节波长到 510 nm，蒸馏水调零。
2.CB0019S-B置于 37℃ 水浴中预热 30 min。
3.在EP 管中按列表中顺序加入上述试剂：

1.组织中 AKP/ALP 活性计算
（1）按照蛋白浓度计算
活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生 1 μ mol 酚定义为 1 个酶活单位。
AKP/ALP(μmol/min/mg prot) = [C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总]÷(Cpr×V样)÷T = 6.8×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr
（2）按照样本质量计算
活性单位定义：37℃中每克组织每分钟催化产生 1 μ mol 酚定义为 1 个酶活单位。
AKP/ALP(μmol/min/g) = [C标准品×(A 测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T = 6.8×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W
注： C标准品：2μmol/mL；V反总：反应体系总体积（mL），1020μL=1.02 mL；Cpr：粗酶液 蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定，建议使用TargetMol生产的BCA蛋白质含量测定试剂盒(C0050)；V样：加入反应体系中上清液体积（mL），0.020mL；V样总：加入提取液体积，1mL；W: 样本质量，g；T：反应时间（min），15 min。
2.血液中 AKP/ALP 活力计算
活性单位定义：37℃中每毫升血液每分钟催化产生 1μmol 酚定义为 1 个酶活单位。
AKP/ALP 活力(μmol/min /mL) = [C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总] ÷V样×V样总÷T = 6.8×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)
注： C标准品：2μmol/mL；V反总：反应体系总体积(mL)，1020μL=1.02 mL；V样：加入反应体系中上清液体积 (mL)，0.020mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间 (min)，15 min。

1.CB0019S-B，CB0019S-C，CB0019S-D 需4℃避光保存。
2.若CB0019S-D变成蓝绿色，则不能使用。
3.加入CB0019S-D后必须立即混匀，否则显色不完全。
4.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
5.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
6.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。