在碱性环境中，AKP/ALP 催化磷酸苯二钠生成游离酚；酚与 4-氨基安替比林和铁氰化钾反应红色亚醌衍生物，在 510nm 有特征光吸收；通过测定 510 nm 吸光度增加速率，来计算AKP 活性。

100T/48S规格的产品组成如下：

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、水浴锅、可调式移液枪、台式离心机、研钵、冰和双蒸水。
二、粗酶液提取：
1.组织：按照组织质量（g）：CB0019M-A体积(mL)为 1：5-10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0019M-A）进行冰浴匀浆。10000rpm，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2.血液可直接测定，或者适当稀释后测定。
三、测定步骤：
1.分光光度计预热 30 min，调节波长到 510 nm，蒸馏水调零；
2.CB0019M-B置于 37℃水浴中预热 30 min；
3.按列表中顺序加入上述试剂：

1. 组织中 AKP/ALP 活性计算
   （1）按照蛋白浓度计算
   活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生 1μmol 酚定义为 1 个酶活单位。
   AKP/ALP (U/mg prot) = [C 标准品 ×(A 测定管-A 对照管 )÷(A 标准管-A 空白管 )×V 反总]÷(Cpr×V 样)÷T = 6.8×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷Cpr
   （2）按照样本质量计算
   活性单位定义：37℃中每克组织每分钟催化产生 1μmol 酚定义为 1 个酶活单位。
   AKP/ALP (U/g) = [C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 反总]÷(W×V 样÷V 样总)÷T =6.8×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷W
2. 血液中 AKP/ALP 活力计算
   活性单位定义：37℃中每毫升血液每分钟催化产生 1μmol 酚定义为 1 个酶活单位。
   AKP/ALP 活力 (U/mL) = [C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 反总] ÷V 样×V 样总÷T =6.8×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)
   注： C 标准品：2μmol/mL；V 反总：反应体系总体积(mL) ，204 μL=0.204 mL；V 样：加入反应体系中上清液体积（mL），0.004mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间（min）， 15 min；W：样本质量，g ；Cpr：样本蛋白浓度。

1.CB0019M-B，CB0019M-C，CB0019M-D 需4℃避光保存。
2.若CB0019M-D变成蓝绿色，则不能使用。
3.加入CB0019M-D后必须立即混匀，否则显色不完全。
4.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
5.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
6.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• CB0019M-碱性磷酸酶(AKPALP)活性检测试剂盒（微量法）-中文(1.28 MB)