Alcohol Dehydrogenase Assay Kit (UV Spectrophotometry)

ADH 催化 NADH 还原乙醛生成乙醇和 NAD+，NADH 在 340nm 处有吸收峰，而 NAD+没有；测定 340nm 吸光度下降速率，来计算 ADH 活性。

50T/48S规格的产品组成如下：

一、自备用品：
紫外分光光度计、1mL石英比色皿、低温离心机、水浴锅、研钵、可调式移液枪和蒸馏水。
二、粗酶液提取：
1.组织：按照组织质量（g）：CB0017UV-A体积(mL)为 1：5-10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0017UV-A）进行冰浴匀浆。16000g，4℃离心 20min，取上清置冰上待测。
2.细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：CB0017UV-A体积（mL）为 500-1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL CB0017UV-A），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；16000g，4℃离心 20min，取上清液置冰上待测。
3.血清等液体：直接测定。
三、测定步骤：
1.紫外分光光度计预热 30 min，调节波长到 340 nm，蒸馏水调零。
2.CB0017UV-B置于25℃水浴中保温 30 min。
3.在 1mL 石英比色皿中依次按下表加入：

四、乙醇脱氢酶(ADH)活性计算：
1.按照蛋白浓度计算
活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟氧化 1μmol NADH为1个酶活单位。
ADH (U/mg prot) = [(△A测定管–△A空白管)÷ε÷d×V反总×10⁶]÷(Cpr×V样)÷T
= 1.61×(△A测定管–△A空白管) ÷Cpr
2.按照样本质量计算
活性单位定义：25℃中每克组织每分钟氧化 1μmol NADH为1个酶活单位。
ADH (U/g) = [(△A测定管–△A空白管)÷ε÷d×V反总×10⁶]÷(W×V样÷V样总)÷T
= 1.61×(△A测定管–△A空白管) ÷W
3.按细胞数量计算
活性单位定义：25℃中每 10⁴ 个细胞每分钟氧化 1μmol NADH为1个酶活单位。
ADH (U/10⁴cell) = [(△A测定管–△A空白管)÷ε÷d×V反总×10⁶]÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T
= 1.61×(△A测定管–△A空白管) ÷细胞数量
4.按液体体积计算
活性单位定义：25℃中每毫升血清每分钟氧化 1μmol NADH为1个酶活单位。
ADH (U/mL) = [(△A测定管–△A空白管)÷ε÷d×V反总×10⁶]÷V样÷T
= 1.61×(△A测定管–△A空白管)
注： ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×10³ L/mol/cm；d：比色皿光径，1 cm；V反总：反应体系总体积，1000μL=0.001 L；10⁶：单位换算系数，1mol=1×10⁶ μmol；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；V样：加入反应体系中上清液体积，100μL=0.1 mL；T：反应时间，1min。

1.CB0017UV-A临用前置于 37℃水浴中预热 30min。
2.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
3.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• CB0017UV-乙醇脱氢酶(ADH)活性检测试剂盒（紫外分光光度法）-中文(1.3 MB)