Alcohol Dehydrogenase Assay Kit (Microanalysis)

ADH 催化 NADH 还原乙醛生成乙醇和 NAD+，NADH 在 340nm 处有吸收峰，而 NAD+没有；测定 340nm 吸光度下降速率，来计算 ADH 活性。

100T/96S规格的产品组成如下：

一、自备用品：
紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板（UV板）、低温离心机、水浴锅、研钵、可调式移液枪和蒸馏水。
二、粗酶液提取：
1.组织：按照组织质量（g）：CB0017M-A体积(mL)为 1：5-10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0017M-A）进行冰浴匀浆。16000g，4℃离心 20min，取上清置冰上待测。
2.细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴ 个）：CB0017M-A体积（mL）为 500-1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL CB0017M-A），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；16000g，4℃离心 20min，取上清液置冰上待测。
3.血清等液体：直接测定。
三、测定步骤：
1.紫外分光光度计/酶标仪预热 30 min，调节波长到 340 nm，蒸馏水调零。
2.CB0017M-B置于25℃水浴中保温 30 min。
3.取微量石英比色皿/96 孔板（UV板），依次按下表加入：

四、乙醇脱氢酶(ADH)活性计算：
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下：
1.按照蛋白浓度计算
活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟氧化 1μmol NADH 为1个酶活单位。
ADH (U/mg prot) = [(△A测定管–△A空白管)÷ε÷d×V反总×10⁶] ÷(Cpr×V样)÷T
= 1.61×(△A测定管–△A空白管) ÷Cpr
2.按照样本质量计算
活性单位定义：25℃中每克组织每分钟氧化 1μmol NADH为1个酶活单位。
ADH (U/g) =[(△A测定管–△A空白管)÷ε÷d×V反总×10⁶] ÷(W×V样÷V样总)÷T
= 1.61×(△A测定管–△A空白管) ÷W
3.按细胞数量计算
活性单位定义：25℃中每10⁴个细胞每分钟氧化 1μmol NADH 为1个酶活单位。
ADH (U/10⁴cell) = [(△A测定管–△A空白管)÷ε÷d×V反总×10⁶] ÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T
= 1.61×(△A测定管–△A空白管) ÷细胞数量
4.按液体体积计算
活性单位定义：25℃中每毫升血清每分钟氧化 1μmol NADH为1个酶活单位。
ADH (U/mL) = [(△A测定管–△A空白管)÷ε÷d×V反总×10⁶] ÷V样÷T
= 1.61×(△A测定管–△A空白管)
注：ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×10³L/mol/cm；d：比色皿光径，1 cm；V反总：反应体系总体积，200μL=2×10^-4 L；10⁶：单位换算系数，1mol=1×10⁶μmol；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W ：样品质量；V样：加入反应体系中上清液体积，20μL=0.02 mL；V样总：提取液体积，1 mL；T：反应时间，1min；细胞数量：以万计。
b.使用 96 孔板测定的计算公式如下：
1.按照蛋白浓度计算
活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟氧化 1μmol NADH 为 1 个酶活单位。
ADH (U/mg prot) = [(△A测定管–△A空白管)÷ε÷d×V反总×10⁶] ÷(Cpr×V样)÷T
=3.215×(△A测定管–△A空白管) ÷Cpr
2.按照样本质量计算
活性单位定义：25℃中每克组织每分钟氧化 1μmol NADH 为 1 个酶活单位。
ADH (U/g) = [(△A测定管–△A空白管)÷ε÷d×V反总×10⁶] ÷(W×V样÷V样总)÷T
= 3.215×(△A测定管–△A空白管) ÷W
3.按细胞数量计算
活性单位定义：25℃中每 10⁴ 个细胞每分钟氧化 1μmol NADH 为 1 个酶活单位。
ADH (U/10⁴ cell) = [(△A测定管–△A空白管)÷ε÷d×V反总×10⁶] ÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T
= 3.215×(△A测定管–△A空白管) ÷细胞数量
4.按液体体积计算
活性单位定义：25℃中每毫升血清每分钟氧化 1μmol NADH 为 1 个酶活单位。
ADH (U/mL) = [(△A测定管–△A空白管)÷ε÷d×V反总×10⁶] ÷V样÷T
= 3.215×(△A测定管–△A空白管)
注：ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×10³L/mol/cm；d：96 孔板光径，0.5 cm；V反总：反应体系 总体积，200μL=2×10^-4 L；10⁶：单位换算系数，1mol=1×10⁶μmol ；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W ：样品质量；V样：加入反应体系中上清液体积，20μL=0.02 mL；V样总：提取液体积，1 mL；T：反应时间，1min；细胞数量：以万计。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。