Name: Acidic Proteinase Assay Kit (Spectrophotometry)
Brand: TargetMol
SKU: CB0010S
Rating: 5 (4 reviews)

Acidic Proteinase Assay Kit (Spectrophotometry)

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Acidic Proteinase Assay Kit (Spectrophotometry)

产品编号 CB0010S

别名 酸性蛋白酶(ACP)活性检测试剂盒（分光光度法）

酸性蛋白酶 (Acidic Proteinase, ACP) 是一种在酸性环境下催化蛋白质水解的酶。该酶主要用于酒精发酵、啤酒酿造、毛皮软化、果酒澄清、酱油酿造、饲料等。

规格	价格	库存	数量
50 T	¥ 715	待询

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产品组成

50T/24S规格的产品组成如下：

组成	规格	储存条件
CB0010S-A	35mL ×1 瓶	4℃保存。
CB0010S-B	粉剂×1 瓶	4℃保存；临用前加10 mL蒸馏水溶解，3天内有效。
CB0010S-C	粉剂×1 瓶	4℃避光保存；临用前加入10 mL CB0010S-A，沸水浴溶解，3天内有效。
CB0010S-D	粉剂×1 瓶	4℃保存；临用前加入50 mL蒸馏水溶解，3天内有效。
CB0010S-E	10mL×1 瓶	4℃保存。
CB0010S-Standard	1mL×1支(0.25μmol/mL)	4℃保存。

注：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

操作说明

一、自备用品：
可见分光光度计、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、研钵/匀浆器、1mL玻璃比色皿、EP 管和蒸馏水。
二、粗酶液提取：
1.组织：按照组织质量（g）：CB0010S-A体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0010S-A）冰浴匀浆，8000g，4℃离心 10min，取上清，即粗酶液。
2.血清或培养液：直接测定。
3.细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：CB0010S-A体积（mL）为 500~1000：1的比例（建议500万细胞加入 1mL CB0010S-A），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7秒，总时间 3min）；然后 8000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。
三、测定操作：
1.分光光度计预热 30min，调节波长到 680 nm，蒸馏水调零。
2.CB0010S-B、CB0010S-C和CB0010S-D置于 30℃水浴保温 30min。
3.在EP管中按顺序加入下列试剂：

试剂名称	对照管 (μL)	测定管 (μL)	空白管 (μL)	标准管 (μL)
粗酶液	100	100
CB0010S-B	200
CB0010S-C		200
混匀后置于 30℃水浴保温10min。
CB0010S-B		200
CB0010S-C	200
混匀后 8000g， 4℃离心 10min，留取上清。
上清液（离心后留存）	200	200
蒸馏水			200
标准品				200
CB0010S-D	1000	1000	1000	1000
CB0010S-E	200	200	200	200
混匀后置于 30℃水浴保温 20min，于 680nm 测定光吸收。

注：1. 测定管与空白管不同，先加CB0010S-C，后加CB0010S-B。

2.空白管和标准管只需要测定 1 次。

四、计算公式：
1.按照蛋白浓度计算
ACP 活性单位定义：30℃每毫克蛋白每分钟催化水解产生1μmol 酪氨酸为1个酶活单位。
ACP活性 (U/mg prot) = C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×稀释倍÷(Cpr×V1)÷T=0.625×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr
2.按照样本质量计算
ACP 活性单位定义：30℃每克样品每分钟催化水解产生1μmol 酪氨酸为1个酶活单位。
ACP 活性 (U/g) = C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×稀释倍数÷(W×V1÷V2)÷T = 0.625×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W
3.按照液体体积计算
ACP 活性单位定义：30℃每毫升样品每分钟催化水解产生 1μmol 酪氨酸为1个酶活单位。
ACP 活性 (U/mL) =C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×稀释倍数÷V1÷T = 0.625×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)
4.按照细胞数量计算
ACP 活性单位定义：30℃每10⁴个细胞每分钟催化水解产生 1μmol 酪氨酸为1个酶活单位。
ACP 活性 (U/10⁴ cell) =C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×稀释倍数÷(细胞数量×V1÷V2)÷T = 0.625×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷细胞数量
注： C标准品：0.25μmol/mL 标准酪氨酸溶液；稀释倍数：(100+200+200)÷200=2.5；Cpr：粗酶液蛋白质浓度（mg/mL），注意该粗酶液不能直接用于蛋白质含量测定，需要另外测定；建议称取同样质量的样品，加入 1mL 蒸馏水匀浆提取离心后，用TargetMol蛋白质含量测定试剂盒 (C0050) 测定；W：样品质量（g）；V1：加入反应体系中粗酶液体积，100=0.1 mL；V2：粗酶液总体积，1mL；T：催化反应时间，10min。