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Acidic Proteinase Assay Kit (Spectrophotometry)

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货号 CB0010S

别名 酸性蛋白酶(ACP)活性检测试剂盒(分光光度法)

酸性蛋白酶 (Acidic Proteinase, ACP) 是一种在酸性环境下催化蛋白质水解的酶。该酶主要用于酒精发酵、啤酒酿造、毛皮软化、果酒澄清、酱油酿造、饲料等。

Acidic Proteinase Assay Kit (Spectrophotometry)

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货号 CB0010S 别名 酸性蛋白酶(ACP)活性检测试剂盒(分光光度法)

酸性蛋白酶 (Acidic Proteinase, ACP) 是一种在酸性环境下催化蛋白质水解的酶。该酶主要用于酒精发酵、啤酒酿造、毛皮软化、果酒澄清、酱油酿造、饲料等。

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产品介绍


生物活性
产品描述
酸性蛋白酶 (Acidic Proteinase, ACP) 是一种在酸性环境下催化蛋白质水解的酶。该酶主要用于酒精发酵、啤酒酿造、毛皮软化、果酒澄清、酱油酿造、饲料等。
别名酸性蛋白酶(ACP)活性检测试剂盒(分光光度法)

检测原理

酸性条件下,ACP 催化酪蛋白水解产生酪氨酸;在碱性条件下,酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝;钨蓝在 680nm 有特征吸收峰,通过测定其吸光度增加,来计算ACP 活性。

产品组成

50T/24S规格的产品组成如下:

组成 规格 储存条件
CB0010S-A 35mL ×1 瓶 4℃保存。
CB0010S-B 粉剂×1 瓶 4℃保存;临用前加10 mL蒸馏水溶解,3天内有效。
CB0010S-C 粉剂×1 瓶 4℃避光保存;临用前加入10 mL CB0010S-A,沸水浴溶解,3天内有效。
CB0010S-D 粉剂×1 瓶 4℃保存;临用前加入50 mL蒸馏水溶解,3天内有效。
CB0010S-E 10mL×1 瓶 4℃保存。
CB0010S-Standard 1mL×1支(0.25μmol/mL) 4℃保存。
注:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

操作说明

一、自备用品:
可见分光光度计、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、研钵/匀浆器、1mL玻璃比色皿、EP 管和蒸馏水。
二、粗酶液提取:
1.组织:按照组织质量(g):CB0010S-A体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL CB0010S-A)冰浴匀浆,8000g,4℃离心 10min,取上清,即粗酶液。
2.血清或培养液:直接测定。
3.细菌、真菌:按照细胞数量(104个):CB0010S-A体积(mL)为 500~1000:1的比例(建议500万细胞加入 1mL CB0010S-A),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7秒,总时间 3min);然后 8000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。
三、测定操作:
1.分光光度计预热 30min,调节波长到 680 nm,蒸馏水调零。
2.CB0010S-B、CB0010S-C和CB0010S-D置于 30℃水浴保温 30min。
3.在EP管中按顺序加入下列试剂:

试剂名称 对照管 (μL) 测定管 (μL) 空白管 (μL) 标准管 (μL)
粗酶液 100 100
CB0010S-B 200
CB0010S-C 200
混匀后置于 30℃水浴保温10min。
CB0010S-B 200
CB0010S-C 200
混匀后 8000g, 4℃离心 10min,留取上清。
上清液(离心后留存) 200 200
蒸馏水 200
标准品 200
CB0010S-D 1000 1000 1000 1000
CB0010S-E 200 200 200 200
混匀后置于 30℃水浴保温 20min,于 680nm 测定光吸收。
注:1. 测定管与空白管不同,先加CB0010S-C,后加CB0010S-B。

2.空白管和标准管只需要测定 1 次。

四、计算公式:
1.按照蛋白浓度计算
ACP 活性单位定义:30℃每毫克蛋白每分钟催化水解产生1μmol 酪氨酸为1个酶活单位。
ACP活性 (U/mg prot) = C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×稀释倍÷(Cpr×V1)÷T=0.625×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr
2.按照样本质量计算
ACP 活性单位定义:30℃每克样品每分钟催化水解产生1μmol 酪氨酸为1个酶活单位。
ACP 活性 (U/g) = C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×稀释倍数÷(W×V1÷V2)÷T = 0.625×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W
3.按照液体体积计算
ACP 活性单位定义:30℃每毫升样品每分钟催化水解产生 1μmol 酪氨酸为1个酶活单位。
ACP 活性 (U/mL) =C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×稀释倍数÷V1÷T = 0.625×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)
4.按照细胞数量计算
ACP 活性单位定义:30℃每104个细胞每分钟催化水解产生 1μmol 酪氨酸为1个酶活单位。
ACP 活性 (U/104 cell) =C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×稀释倍数÷(细胞数量×V1÷V2)÷T = 0.625×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷细胞数量
注: C标准品:0.25μmol/mL 标准酪氨酸溶液;稀释倍数:(100+200+200)÷200=2.5;Cpr:粗酶液蛋白质浓度(mg/mL),注意该粗酶液不能直接用于蛋白质含量测定,需要另外测定;建议称取同样质量的样品,加入 1mL 蒸馏水匀浆提取离心后,用TargetMol蛋白质含量测定试剂盒 (C0050) 测定;W:样品质量(g);V1:加入反应体系中粗酶液体积,100=0.1 mL;V2:粗酶液总体积,1mL;T:催化反应时间,10min。

注意事项

1.蛋白定量测定,建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

计算器

  • 摩尔浓度 计算器
  • 稀释 计算器
  • 配液 计算器
  • 分子量 计算器

体内实验配液计算器

请在以下方框中输入您的动物实验信息后点击计算,可以得到母液配置方法和体内配方的制备方法:
TargetMol | Animal experiments 比如您的给药剂量是10 mg/kg,每只动物体重20g,给药体积100 μLTargetMol | Animal experiments 一共给药动物10只,您使用的配方为5%TargetMol | reagent DMSO + 30%PEG300 + 5%Tween 80 + 60%Saline/PBS/ddH2O , 那么您的工作液浓度为2mg/mL
母液配置方法: 2 mg 药物溶于 50 μLDMSOTargetMol | reagent ( 母液浓度为 40 mg/mL ), 如您需要配置的浓度超过该产品的溶解度,请先与我们联系。
体内配方的制备方法:50μLDMSOTargetMol | reagent 母液,添加 300 μLPEG300TargetMol | reagent 混匀澄清,再加 50μLTween80, 混匀澄清,再加 600μLSaline/PBS/ddH2OTargetMol | reagent 混匀澄清

以上为“体内实验配液计算器”的使用方法举例,并不是具体某个化合物的推荐配制方式,请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解方案。

方案所需的各类助溶剂如: DMSOPEG300 / PEG400Tween 80SBE-β-CD玉米油 等, 均可在TargetMol网站点击购买。
1 请输入动物实验的基本信息
mg/kg
g
μL
2 请输入动物体内配方组成,不同的产品配方组成不同,如有配方需求,可先联系我们提供正确的体内配方。
% DMSO
%
% Tween 80
% Saline/PBS/ddH2O

剂量转换

对于不同动物的给药剂量换算,您也可以参考 更多

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