Name: Acidic Proteinase Assay Kit (Microanalysis)
Brand: TargetMol
SKU: CB0010M
Rating: 5 (4 reviews)

Acidic Proteinase Assay Kit (Microanalysis)

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Acidic Proteinase Assay Kit (Microanalysis)

产品编号 CB0010M

别名 酸性蛋白酶(ACP)活性检测试剂盒（微量法）

酸性蛋白酶 (Acidic Proteinase, ACP) 是一种在酸性环境下催化蛋白质水解的酶。该酶主要用于酒精发酵、啤酒酿造、毛皮软化、果酒澄清、酱油酿造、饲料等。

规格	价格	库存	数量
100 T	¥ 1,372	待询

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产品组成

100T/48S规格的产品组成如下：

组成	规格	储存条件
CB0010M-A	60mL×1 瓶	4℃保存。
CB0010M-B	粉剂×1 瓶	4℃保存; 临用前加4mL 蒸馏水溶解，3天内有效。
CB0010M-C	粉剂×1 瓶	4℃避光保存；临用前加入4 mL CB0010M-A，沸水浴中磁力搅拌溶解，3天内有效。
CB0010M-D	粉剂×1 瓶	4℃保存；临用前加入 20 mL 蒸馏水溶解，3天内有效。
CB0010M-E	4mL×1 瓶	4℃保存。
CB0010M-Standard	1mL×1支(0.25μmol/mL)	4℃保存。

注：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

操作说明

一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、微量玻璃比色皿/96孔板、蒸馏水等。
二、粗酶液提取：
1.组织：按照组织质量（g）：CB0010M-A体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0010M-A）冰浴匀浆，8000g，4℃离心 10min，取上清，即粗酶液。
2.血清或培养液：直接测定。
3.细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：CB0010M-A体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL CB0010M-A），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7秒，总时间 3min）；然后 8000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。
三、测定操作：

分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长到 680 nm，蒸馏水调零。
CB0010M-B、CB0010M-C和CB0010M-D置于 30℃水浴保温 30min。
在EP管中按顺序加入下列试剂：

试剂名称	对照管 (μL)	测定管 (μL)	空白管 (μL)	标准管 (μL)
粗酶液	20	20
CB0010M-B	40
CB0010M-C		40
混匀后置于 30℃水浴保温10min。
CB0010M-B		40
CB0010M-C	40
混匀后 8000g， 4℃离心 10min，取上清。
上清液（离心后获取）	40	40
蒸馏水			40
标准品				40
CB0010M-D	200	200	200	200
CB0010M-E	40	40	40	40
混匀后置于 30℃水浴保温 20min，取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板中，于680nm测定光吸收，分别记为A对照管、A测定管、A空白管、A标准管。

注：1. 测定管与空白管不同，先加CB0010M-C，后加CB0010M-B。

2.空白管和标准管只需要测 1-2次。

四、计算公式：
1.按照蛋白浓度计算
ACP 活性单位定义：30℃每毫克蛋白每分钟催化水解产生 1μmol 酪氨酸为 1 个酶活单位。
ACP 活性 (U/mg prot) = C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×稀释倍数÷(Cpr×V1)÷T= 3.125×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr
2.按照样本质量计算
ACP 活性单位定义：30℃每克样品每分钟催化水解产生 1μmol 酪氨酸为 1 个酶活单位。
ACP 活性 (U/g)=C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×稀释倍数÷(W×V1÷V2)÷T = 3.125×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W
3.按照液体体积计算
ACP 活性单位定义：30℃每毫升样品每分钟催化水解产生 1μmol 酪氨酸为 1 个酶活单位。
ACP 活性 (U/mL) =C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×稀释倍数÷V1÷T = 3.125×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)
4.按照细胞数量计算
ACP 活性单位定义：30℃每 10⁴个细胞每分钟催化水解产生 1μmol 酪氨酸为 1 个酶活单位。
ACP 活性 (U/10⁴ cell) =C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×稀释倍数÷(细胞数量×V1÷V2)÷T = 3.125×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷细胞数量
注： C标准品：0.25 μmol/mL 标准酪氨酸溶液；稀释倍数：(20+40+40)÷40=2.5；Cpr：粗酶液蛋白质浓度（mg/mL），注意该粗酶液不能直接用于蛋白质含量测定，需要另外测定；建议称取同样质量的样品，加入 1mL 蒸馏水匀浆提取离心后，用TargetMol蛋白质含量测定试剂盒测定(C0050)；W：样品质量（g）；V1：加入反应体系中粗酶液体积（mL），20μL=2×10^-2 mL；V2：粗酶液总体积（mL），1mL；T：催化反应时间（min），10min。