Acetylcholinesterase Assay Kit (Spectrophotometry)

乙酰胆碱酯酶催化Ach水解生成胆碱，胆碱与二硫对硝基苯甲酸(DTNB)作用生成 5-巯基-硝基苯甲酸(TNB)；TNB在412nm处有吸收峰，通过测定412 nm吸光度增加速率，计算乙酰胆碱酯酶活性。

50T/48S规格的产品组成如下：

一、自备用品：
可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、研钵/匀浆器和蒸馏水。
二、粗酶液提取：
1.细菌、真菌或培养细胞：按照细胞数量（10⁴个）：CB0008S-ES体积（mL）为 500-1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL CB0008S-ES），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 8000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。
2.组织：按照组织质量(g)：CB0008S-ES体积(mL)为 1：5-10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0008S-ES），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3.血清等液体：直接测定。
三、测定步骤：
1.可见分光光度计预热 30 min，调节波长到 412 nm，蒸馏水调零。
2.CB0008S-A置于 37℃水浴中预热 30min。
3.取1mL 玻璃比色皿，依次按下表加入：

四、乙酰胆碱酯酶活性计算：
1.组织 AchE 活性：
（1）按照蛋白浓度计算：
活性单位定义：每毫克蛋白每分钟催化产生 1nmol TNB 的酶量为 1 个酶活单位。
AchE 酶活(U/mg prot) = [(△A测定管-△A空白管)÷ε÷d×V反总×10⁹]÷(Cpr ×V样)÷T = 245×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr
（2）按照样本质量计算：
活性单位定义：每克组织每分钟催化产生 1nmol TNB 的酶量为 1 个酶活单位。
AchE 酶活(U/g)= [(△A测定管-△A空白)÷ε÷d×V反总×10⁹]÷(W ×V样÷V样总)÷T = 245×(△A测定管-△A空白管)÷W
2.细菌、细胞 AchE 活性：
活性单位定义：每 10⁴ 个细胞每分钟催化产生 1nmol TNB 的酶量为 1 个酶活单位。
AchE 酶活(U/10⁴ cell)= [(△A测定管-△A空白)÷ε÷d×V反总×10⁹]÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T = 245×(△A测定管-△A空白管)÷细胞数量
3.血清 AchE 活性：
活性单位定义：每毫升血清每分钟催化产生 1nmol TNB 的酶量为 1 个酶活单位。
AchE 酶活(U/mL)= [(△A测定管-△A空白管)÷ε÷d×V反总×10⁹]÷V样÷T = 245×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr
注：ε：TNB 摩尔消光系数，13.6×10³ L/mol/cm；d：比色皿光径，1 cm；V反总：反应体系总体积（L），1 mL=0.001 L；10⁶：1mol=1×10⁶μmol；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：蛋白浓度（mg/mL）；W：样本质量，g；V样：加入上清液体积（mL），0.1 mL；T：反应时间（min），3 min。

1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。