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常见问题解答
Acetylcholinesterase Assay Kit (Microanalysis)
Acetylcholinesterase Assay Kit (Microanalysis)
还可以
产品编号 CB0008M
别名 乙酰胆碱酯酶(AchE)活性检测试剂盒（微量法）
乙酰胆碱酯酶(AchE)属于丝氨酸水解酶，广泛存在于各种动物组织和血清中。Ach催化乙酰胆碱(Ach)水解，在神经传导调节中起重要作用。
| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 100 T | ¥ 330 | 待询 |
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TargetMol 的所有产品仅用作科学研究或药证申报，不能被用于人体，我们不向个人提供产品和服务。请您遵守承诺用途，不得违反法律法规规定用于任何其他用途。
检测原理
乙酰胆碱酯酶催化Ach水解生成胆碱，胆碱与二硫对硝基苯甲酸(DTNB)作用生成 5-巯基-硝基苯甲酸(TNB)；TNB在412nm处有吸收峰，通过测定412 nm吸光度增加速率，计算乙酰胆碱酯酶活性。
产品组成
100T/96S规格的产品组成如下：
| 组成 | 规格 | 储存条件 |
|---|---|---|
| CB0008M-ES | 液体100mL×1 瓶 | 4℃保存。 |
| CB0008M-A | 液体20mL×1 瓶 | 4℃保存。临用前置于 37℃水浴中预热 30min。 |
| CB0008M-B | 粉剂×1 支 | 4℃保存。临用前加入 1.3mL CB0008M-A，充分震荡溶解。 |
| CB0008M-C | 粉剂×1 支 | 4℃保存。临用前加入 1.3mL CB0008M-A，充分震荡溶解。 |
操作说明
一、自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、研钵/匀浆器和蒸馏水。
二、粗酶液提取：
1.细菌、真菌或培养细胞：按照细胞数量（104个）：CB0008M-ES体积（mL）为 500-1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL CB0008M-ES），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 8000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。
2.组织：按照组织质量(g)：CB0008M-ES体积(mL)为 1：5-10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0008M-ES），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3.血清等液体：直接测定。
三、测定步骤：
1.分光光度计/酶标仪预热 30 min，调节波长到 412 nm，蒸馏水调零。
2.CB0008M-A置于 37℃水浴中预热 30min。
3.取微量玻璃比色皿/96 孔板，依次按下表加入：
| 试剂名称 | 对照管 (µL) | 测定管 (µL) |
|---|---|---|
| 蒸馏水 | 20 | |
| CB0008M-A | 160 | |
| CB0008M-B | 10 | |
| CB0008M-C | 10 | |
| 迅速混匀，于 412nm 处测定 3min 内吸光值变化，第 10s 吸光值记为 A1，第 190s 吸光值记为 A2，△A空白管=A2－A1。 | ||
| 样品上清液 | 20 | |
| CB0008M-A | 160 | |
| CB0008M-B | 10 | |
| CB0008M-C | 10 | |
| 迅速混匀，于 412nm 处测定 3min 内吸光值变化，第 10s 吸光值记为 A3，第 190s 吸光值记为 A4，△A测定管=A4-A3。 | ||
四、乙酰胆碱酯酶活性计算：
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1.组织 AchE 活性
（1）按照蛋白浓度计算
活性单位定义：每毫克蛋白每分钟催化产生 1nmol TNB 的酶量为1个酶活单位。
AchE 酶活(U/mg prot)=[(△A测定管-△A空白管)÷ε÷d×V反总×109]÷(Cpr×V样)÷T= 245×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr
（2）按照样本质量计算
活性单位定义：每克组织每分钟催化产生 1nmol TNB 的酶量为1个酶活单位。
AchE 酶活(U/g)= [(△A测定管-△A空白)÷ε÷d×V反总×109]÷(W ×V样÷V样总)÷T = 245×(△A测定管-△A空白管)÷W
2.细菌、真菌或培养细胞 AchE 活性
活性单位定义：每 104 个细胞每分钟催化产生 1nmol TNB 的酶量为1个酶活单位。
AchE 酶活(U/104 cell)= [(△A测定管-△A空白)÷ε÷d×V反总×109]÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T = 245×(△A测定管-△A空白管)÷细胞数量
3.血清 AchE 活性
活性单位定义：每毫升血清每分钟催化产生 1nmol TNB 的酶量为1个酶活单位。
AchE 酶活(U/mL)= [(△A测定管-△A空白管)÷ε÷d×V反总×109]÷V样÷T = 245×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr
注： ε：TNB 摩尔消光系数，13.6×103 L/mol/cm；d：比色皿光径，1 cm；V反总：反应体系总体积（L），200μL=2×10-4L；V样总：提取液体积，1 mL；106：1mol=1×106μmol；Cpr：蛋白浓度（mg/mL）；V样：加入上清液体积（mL），0.02 mL；W ：样品质量；T：反应时间（min），3 min。
b.使用 96 孔板测定的计算公式如下
1.组织 AchE 活性
（1）按照蛋白浓度计算
活性单位定义：每毫克蛋白每分钟催化产生 1nmol TNB 的酶量为1个酶活单位。
AchE 酶活(U/mg prot)= [(△A测定管-△A空白管)÷ε÷d×V反总×109]÷(Cpr×V样)÷T = 490×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr
（2）按照样本质量计算
活性单位定义：每克组织每分钟催化产生 1nmol TNB 的酶量为1个酶活单位。
AchE 酶活(U/g)= [(△A测定管-△A空白)÷ε÷d×V反总×109]÷(W ×V样÷V样总)÷T= 490×(△A测定管-△A空白管)÷W
2.细菌、真菌或培养细胞 AchE 活性
活性单位定义：每 104个细胞每分钟催化产生 1nmol TNB 的酶量为1个酶活单位。
AchE 酶活(U/104 cell)= [(△A测定管-△A空白)÷ε÷d×V反总×109]÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T = 490×(△A测定管-△A空白管)÷细胞数量
3.血清 AchE 活性
活性单位定义：每毫升血清每分钟催化产生 1nmol TNB 的酶量为1个酶活单位。
AchE 酶活(U/mL) = [(△A测定管-△A空白管)÷ε÷d×V反总×109]÷V样÷T= 490×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr
注： ε：TNB 摩尔消光系数，13.6×103 L/mol/cm；d：96 孔板光径，0.5 cm；V反总：反应体系总体积（L），200μL=2×10-4L；V样总：提取液体积，1 mL；106：1mol=1×106μmol；Cpr：蛋白浓度 (mg/mL)；V样：加入上清液体积（mL），0.02 mL；W ：样品质量；T：反应时间（min），3 min。
注意事项
1.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
2.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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