Acetaldehyde Dehydrogenase Assay Kit (UV Spectrophotometry)

在辅酶Ⅰ存在的条件下，乙醛脱氢酶催化乙醛和 NAD+转化为乙酸和 NADH，在 340nm 处的吸光值会增加，测定 340nm 处的吸光值变化，可计算得到乙醛脱氢酶的活性。

50T/48S规格的产品组成如下：

1.自备用品：
天平、离心机、恒温水浴锅、紫外分光光度计、1mL 石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
2.ALDH提取：
1)组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5-10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL CB0006UV-ES）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃，离心 20min，取上清置于冰上待测。
2)细胞：按照细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（mL）为 500-1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL CB0006UV-ES），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒， 总时间 3min）；然后 10000g，4℃，离心 20min，取上清置于冰上待测。
3)液体：直接检测或适当稀释后再进行检测。
3.测定步骤：
1)分光光度计预热 30min，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2)将CB0006UV-A 37℃（哺乳动物）或 25℃（其他物种）预热 15min。
3)在1mL 石英比色皿中依次加入下列试剂：

4.ALDH酶活计算：
1)按蛋白浓度计算
酶活定义：每毫克蛋白每分钟催化还原 1 nmol NAD+ 的酶量为 1 个酶活单位。
ALDH 酶活 (U/mg prot) = △A÷(ε×d)×10⁹× V反总÷(V样×Cpr)÷T = 804×△A÷Cpr
2)按样本质量计算
酶活定义：每克样品每分钟催化还原 1 nmol NAD+ 的酶量为 1 个酶活单位。
ALDH 酶活 (U/g) = △A÷(ε×d) ×10⁹ ×V反总÷(V样×W÷V样总)÷T = 804×△A÷W
3)按照细胞数量计算
酶活定义：每 10⁴ 个细胞每分钟催化还原 1 nmol NAD+ 的酶量为 1 个酶活单位。
ALDH 酶活 (U/10⁴ cell) = △A÷(ε×d)× 10⁹ ×V反总÷[V样÷V样总×细胞数量(万个)]÷T = 804×△A÷细胞数量(万个)
4)按液体体积计算
酶活定义：每毫升蛋白每分钟催化还原 1 nmol NAD+ 的酶量为 1 个酶活单位。
ALDH 酶活 (U/mL) = △A÷(ε×d) × 10⁹×V反总÷V样÷T = 804×△A
注： ε：NADH 微摩尔消光系数，6.22×10³ L/ mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应体系总体积，1mL=0.001L；V样：反应体系中样本体积，0.2mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W： 样本质量，g，V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间：1min；10⁹：单位换算系数，1mol=10⁹nmol。

1.当样品 ΔA大于1时，建议将样本用提取液稀释后再进行测定；当 ΔA小于0.01时，可以延长反应时间来测定，并注意计算时同步更改计算公式。
2.蛋白定量测定，建议使用TargetMol生产的BCA Protein Quantification Kit (C0050)。
3.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。